| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1.1 胚胎干细胞研究进展 | 第13-20页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞的发展及特性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞内的分子信号途径 | 第14-19页 |
| 1.1.3. 诱导多能干细胞的发展 | 第19-20页 |
| 1.1.4 胚胎干细胞的应用前景 | 第20页 |
| 1.2 表观修饰调控在胚胎干细胞中的作用 | 第20-24页 |
| 1.2.1 表观遗传学的发展及概述 | 第20-21页 |
| 1.2.2 组蛋白修饰对于胚胎干细胞的调控作用 | 第21-23页 |
| 1.2.3 DNA 甲基化修饰对于胚胎干细胞的调控作用 | 第23-24页 |
| 1.3 MicroRNA 研究及其对胚胎干细胞的调控作用 | 第24-32页 |
| 1.3.1 MicroRNA 的合成及作用 | 第24-27页 |
| 1.3.2 MicroRNA 在胚胎干细胞中的调控作用 | 第27-28页 |
| 1.3.3 MicroRNA 在其它干细胞中的调控作用 | 第28-31页 |
| 1.3.4 MicroRNA 研究所面临的挑战 | 第31-32页 |
| 1.4 小分子化合物在胚胎干细胞中的应用 | 第32-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-49页 |
| 2.1 材料 | 第34-38页 |
| 2.1.1 引物 | 第34页 |
| 2.1.2 载体 | 第34页 |
| 2.1.3 菌株、细胞 | 第34页 |
| 2.1.4 工具酶、试剂 | 第34-36页 |
| 2.1.5 主要耗材和仪器 | 第36-37页 |
| 2.1.6 主要溶液的配置 | 第37-38页 |
| 2.1.7 实验用生物学软件和数据库 | 第38页 |
| 2.2 方法 | 第38-49页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第38-39页 |
| 2.2.2 细胞培养与转染 | 第39页 |
| 2.2.3 小分子化合物处理细胞 | 第39-40页 |
| 2.2.4 基因组 DNA 提取，总 RNA 提取及反转录，DNA 片段胶回收 | 第40-42页 |
| 2.2.5 载体构建 | 第42-45页 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 | 第45页 |
| 2.2.7 双萤光素酶检测 | 第45-46页 |
| 2.2.8 碱性磷酸酶检测 | 第46-47页 |
| 2.2.9 Real-time PCR 检测反应 | 第47-49页 |
| 第三章 结果 | 第49-88页 |
| 3.1 AICAR 与 LIF 共同作用利于 ES 细胞标志基因的表达 | 第49-53页 |
| 3.1.1 AICAR 与 LIF 共同作用上调 ES 细胞标志基因的表达 | 第49-51页 |
| 3.1.2 AICAR 能拮抗 RA 诱导的 ES 细胞的分化 | 第51-53页 |
| 3.2 AICAR 有利于 J1 小鼠 ES 细胞的多能性维持 | 第53-59页 |
| 3.2.1 AICAR 能够显著上调干性相关基因的表达而下调分化相关基因的表达 | 第53-56页 |
| 3.2.2 对 AICAR 处理后变化显著基因的 GO 和 KEGG 分析 | 第56-59页 |
| 3.3 AICAR 激活 BMP 通路利于对 J1 小鼠 ES 细胞的多能性维持 | 第59-63页 |
| 3.3.1 AICAR 可激活 BMPs 及其下游调控因子 | 第59-60页 |
| 3.3.2 AICAR 可通过激活 BMP 通路拮抗 RA 诱导的分化 | 第60-63页 |
| 3.4 AICAR 影响 J1 小鼠 ES 细胞的表观遗传修饰 | 第63-67页 |
| 3.5 AICAR 影响 J1 小鼠 ES 细胞 miRNAs 的表达 | 第67-75页 |
| 3.5.1 sRNA 高通量测序数据的概括 | 第67-70页 |
| 3.5.2 AICAR 调控 ES 细胞相关的 miRNA 的表达 | 第70-75页 |
| 3.6 miR-134 表达的下调在一定程度上促进了干性基因的表达 | 第75-80页 |
| 3.6.1 载体构建及验证 | 第75-79页 |
| 3.6.2 miR-134 在一定程度上抑制了干性基因的表达 | 第79-80页 |
| 3.7 靶向 Myc 基因的 miRNA 的预测及验证 | 第80-88页 |
| 3.7.1 预测 miRNAs 表达载体的构建及验证 | 第80-83页 |
| 3.7.2 靶向 Myc 的 miRNAs 的验证 | 第83-88页 |
| 第四章 讨论与研究总结 | 第88-94页 |
| 4.1 讨论 | 第88-92页 |
| 4.2 研究总结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-108页 |
| 附录 1：蛋白编码基因的 Real-time PCR 引物序列 | 第108-110页 |
| 附录 2：miRNAs Real-time PCR 引物序列 | 第110-112页 |
| 附录 3：AICAR 处理调控 miRNAs 的表达 | 第112-116页 |
| 英文缩略词表 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 作者简介 | 第119页 |
