| 摘要 | 第2-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 第一章 综述:MDCK细胞系的修饰和应用 | 第12-24页 |
| 1. MDCK细胞 | 第12页 |
| 2. MDCK细胞的培养方式 | 第12-15页 |
| 2.1 传统培养方式 | 第12-13页 |
| 2.2 无血清贴壁培养 | 第13页 |
| 2.3 微载体细胞悬浮培养法 | 第13-15页 |
| 2.3.1 微载体的选择 | 第13-14页 |
| 2.3.2 微载体培养的优缺点 | 第14-15页 |
| 3. MDCK细胞系的修饰 | 第15-19页 |
| 3.1 稳定表达人Siat7e基因的MDCK全悬浮细胞系的建立 | 第15-16页 |
| 3.2 稳定表达TMPRSS2的MDCK细胞系 | 第16-17页 |
| 3.3 稳定表达TIGAR基因的MDCK细胞系 | 第17-19页 |
| 4. 小结 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 第二章 两种修饰的MDCK细胞系悬浮培养的驯化 | 第24-46页 |
| 1. 材料与方法 | 第24-32页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1.1 细胞株 | 第24-25页 |
| 1.1.2 试剂与仪器 | 第25页 |
| 1.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 1.2.1 MDCK细胞的复苏 | 第25页 |
| 1.2.2 MDCK细胞传代 | 第25页 |
| 1.2.3 MDCK细胞在低血清培养基中的适应和传代 | 第25-26页 |
| 1.2.4 MDCK低血清培养细胞的冻存和复苏 | 第26页 |
| 1.2.5 MDCK细胞生长曲线的测定 | 第26页 |
| 1.2.6 细胞密度、存活率及比生长速率的测定及计算 | 第26-27页 |
| 1.2.7 TG-418-E5细胞微载体悬浮驯化 | 第27-28页 |
| 1.2.8 TG-418-E5细胞低血清培养驯化 | 第28-29页 |
| 1.2.9 TG-418-E5贴壁性分析 | 第29页 |
| 1.2.10 M54细胞无血清全悬浮悬浮驯化 | 第29-31页 |
| 1.2.11 细胞的病原检测 | 第31-32页 |
| 2. 结果 | 第32-43页 |
| 2.1 TG-418-E5细胞微载体悬浮驯化 | 第32-37页 |
| 2.1.1 微载体浓度对TG-418-E5细胞生长的影响 | 第32-33页 |
| 2.1.2 不同初始接种密度对TG-418-E5细胞生长的影响 | 第33-34页 |
| 2.1.3 不同补液方式对TG-418-E5细胞生长的影响 | 第34页 |
| 2.1.4 血清浓度对TG-418-E5细胞生长的影响 | 第34-35页 |
| 2.1.5 TG-418-E5细胞在微载体上培养的生长曲线 | 第35-36页 |
| 2.1.6 TG-418-E5细胞与MDCK细胞在5%血清下的贴壁性分析 | 第36页 |
| 2.1.7 TG-418-E5细胞低血清培养 | 第36-37页 |
| 2.2 M54细胞无血清全悬浮驯化 | 第37-43页 |
| 2.2.1 M54细胞无血清驯化 | 第37-38页 |
| 2.2.2 M54细胞单细胞悬浮驯化 | 第38页 |
| 2.2.3 M54x悬浮细胞形态 | 第38-40页 |
| 2.2.4 细胞最佳培养条件 | 第40-43页 |
| 3. 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 两种修饰的MDCK细胞用于增殖禽流感病毒的初步探究 | 第46-60页 |
| 1. 材料与方法 | 第47-51页 |
| 1.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 1.1.1 细胞株、病毒的准备 | 第47页 |
| 1.1.2 试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 1.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 1.2.1 病毒感染 | 第48页 |
| 1.2.2 病毒效价检测 | 第48页 |
| 1.2.3 MDCK细胞微载体悬浮培养的病毒HA效价 | 第48-49页 |
| 1.2.4 TG-418-E5低血清培养时病毒生长情况 | 第49页 |
| 1.2.5 病毒感染悬浮培养的M54x细胞 | 第49-50页 |
| 1.2.6 生物反应器培养M54x悬浮细胞的准备 | 第50-51页 |
| 1.2.7 禽流感病毒在不同培养方式中的生长情况 | 第51页 |
| 2. 结果 | 第51-57页 |
| 2.1 禽流感疫苗株在微载体培养的TG-418-E5细胞和母本MDCK细胞中的增殖情况比较 | 第51-52页 |
| 2.2 TG-418-E5与母本MDCK细胞(5-TG、5-MDCK)在低血清培养基中的接种病毒情况比较 | 第52-53页 |
| 2.3 接种M54x悬浮细胞的病毒感染量,TPCK-胰酶浓度以及感染温度 | 第53-55页 |
| 2.4 禽流感疫苗在摇瓶培养的M54x细胞中的增殖情况 | 第55页 |
| 2.5 反应器增殖禽流感疫苗株 | 第55-56页 |
| 2.6 禽流感病毒在不同培养方式中的生长情况 | 第56-57页 |
| 3. 讨论 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
