| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 我国粮食储藏现状 | 第14-15页 |
| 1.2 粮食储藏国内外研究现状 | 第15-23页 |
| 1.2.1 稻谷储藏与环境 | 第15-16页 |
| 1.2.2 稻谷储藏与淀粉 | 第16页 |
| 1.2.3 稻谷储藏与蛋白质 | 第16-17页 |
| 1.2.4 稻谷储藏与脂类 | 第17-18页 |
| 1.2.5 种子储藏与基因 | 第18-23页 |
| 1.2.5.1 与DNA修复有关的基因 | 第18-19页 |
| 1.2.5.2 与蛋白质修复有关的基因 | 第19-20页 |
| 1.2.5.3 与抗氧化有关的基因 | 第20-22页 |
| 1.2.5.4 与玻璃体形成有关的基因 | 第22-23页 |
| 1.3 异天冬氨酸甲基转移酶(Protein L-isoaspartyl Methyltransferase,PIMT) | 第23-25页 |
| 1.3.1 PIMT修复机制 | 第23-24页 |
| 1.3.2 PIMT研究进展 | 第24-25页 |
| 1.3.2.1 PIMT与低等生物 | 第24页 |
| 1.3.2.2 PIMT与动物 | 第24页 |
| 1.3.2.3 PIMT与植物 | 第24-25页 |
| 1.4 转录组学 | 第25-26页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第26-27页 |
| 1.6 技术路线 | 第27-28页 |
| 第2章 水稻品种的筛选 | 第28-36页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 材料与设备 | 第28-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.2.2 主要设备 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29页 |
| 2.3.1 稻谷初始含水量测定 | 第29页 |
| 2.3.2 人工老化实验 | 第29页 |
| 2.3.3 发芽率测定 | 第29页 |
| 2.3.4 电导率测定 | 第29页 |
| 2.4 结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.4.1 稻谷发芽率及P_(50) | 第29-32页 |
| 2.4.2 稻谷各老化时间下电导率值 | 第32-33页 |
| 2.4.3 稻谷P_(50)与电导率相关性分析 | 第33-34页 |
| 2.5 本章总结 | 第34-36页 |
| 第3章 转录组学分析 | 第36-40页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37页 |
| 3.3.1 样品处理 | 第37页 |
| 3.3.2 分析方法 | 第37页 |
| 3.4 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.4.1 老化前后稻谷转录本表达差异 | 第37-38页 |
| 3.4.2 不同品种老化前后基因表达差异 | 第38页 |
| 3.4.3 储藏相关基因筛选 | 第38-39页 |
| 3.4.4 陈化相关基因筛选 | 第39页 |
| 3.5 本章总结 | 第39-40页 |
| 第4章 稻谷PIMT1基因生物信息学分析及其功能初探 | 第40-53页 |
| 4.1 引言 | 第40-41页 |
| 4.2 材料与设备 | 第41页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.2.2 主要设备与试剂 | 第41页 |
| 4.3 实验方法 | 第41-44页 |
| 4.3.1 植物中PIMT基因序列的获得 | 第41页 |
| 4.3.2 植物PIMT蛋白家族的同源性与进化树分析 | 第41页 |
| 4.3.3 稻谷总RNA提取 | 第41-42页 |
| 4.3.4 总RNA定量及质量测定 | 第42页 |
| 4.3.5 引物设计 | 第42页 |
| 4.3.6 cDNA合成 | 第42-43页 |
| 4.3.7 qPCR定量方法 | 第43页 |
| 4.3.8 数据分析 | 第43-44页 |
| 4.4 结果与分析 | 第44-52页 |
| 4.4.1 稻谷PIMT1基因结构分析 | 第44-45页 |
| 4.4.2 植物中PIMT蛋白同源性分析 | 第45-49页 |
| 4.4.3 PIMT基因家族进化关系 | 第49页 |
| 4.4.4 稻谷总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 4.4.5 Cq值与pTriEX-4/PIMT1浓度标准曲线 | 第50页 |
| 4.4.6 稻谷PIMT1转录水平表达量 | 第50-52页 |
| 4.5 本章总结 | 第52-53页 |
| 第5章 水稻PIMT1基因的克隆及载体构建 | 第53-66页 |
| 5.1 引言 | 第53页 |
| 5.2 材料与设备 | 第53-56页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 5.2.2 主要设备与试剂 | 第54-56页 |
| 5.3 实验方法 | 第56-60页 |
| 5.3.1 稻谷总RNA提取 | 第56页 |
| 5.3.2 总RNA浓度及纯度的测定 | 第56页 |
| 5.3.3 RNA非变性琼脂糖凝胶电泳 | 第56页 |
| 5.3.4 cDNA合成 | 第56-57页 |
| 5.3.5 设计合成引物 | 第57页 |
| 5.3.6 PCR反应体系 | 第57页 |
| 5.3.7 DNA琼脂糖凝胶电泳检测 | 第57-58页 |
| 5.3.8 DNA纯化 | 第58页 |
| 5.3.9 琼脂糖胶回收纯化 | 第58页 |
| 5.3.10 DNA酶切 | 第58页 |
| 5.3.11 PIMT1与pTriEX-4连接反应 | 第58-59页 |
| 5.3.12 感受态细胞转化 | 第59页 |
| 5.3.13 细菌扩大培养及菌落PCR鉴定 | 第59页 |
| 5.3.14 质粒提取 | 第59-60页 |
| 5.3.15 测序鉴定 | 第60页 |
| 5.3.16 菌种保存 | 第60页 |
| 5.4 结果与分析 | 第60-64页 |
| 5.4.1 稻谷总RNA提取 | 第60-61页 |
| 5.4.2 稻谷PIMT基因克隆 | 第61-62页 |
| 5.4.3 稻谷PIMT1表达载体构建及鉴定 | 第62-63页 |
| 5.4.4 测序结果鉴定 | 第63-64页 |
| 5.5 本章总结 | 第64-66页 |
| 第6章 稻谷PIMT1蛋白表达及对大肠杆菌抗热胁迫能力的影响 | 第66-76页 |
| 6.1 引言 | 第66页 |
| 6.2 材料与设备 | 第66-69页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第66页 |
| 6.2.2 实验设备与试剂 | 第66-69页 |
| 6.3 实验方法 | 第69-72页 |
| 6.3.1 pTriEX-4/OsPIMT1重组质粒的提取 | 第69页 |
| 6.3.2 BL21 (DE3)感受态细胞转化 | 第69页 |
| 6.3.3 pTriEX-4/Os PIMT1融合蛋白的诱导表达 | 第69-70页 |
| 6.3.4 可溶性蛋白和不可溶性蛋白分离 | 第70页 |
| 6.3.5 SDS-PAGE分析PIMT蛋白表达 | 第70页 |
| 6.3.6 Western-Blotting检测 | 第70-71页 |
| 6.3.7 菌落生长率实验 | 第71-72页 |
| 6.4 结果与分析 | 第72-74页 |
| 6.4.1 pTriEX-4/OsPIMT1融合蛋白的诱导表达 | 第72页 |
| 6.4.2 表达蛋白可溶性鉴定 | 第72-73页 |
| 6.4.3 稻谷PIMT1对大肠杆菌抗热胁迫能力的影响 | 第73-74页 |
| 6.5 本章总结 | 第74-76页 |
| 第7章 全文结论、创新点及展望 | 第76-80页 |
| 7.1 全文结论 | 第76-77页 |
| 7.2 创新点 | 第77页 |
| 7.3 展望 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
