免疫法检测D-二聚体的研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-29页 |
| ·D-二聚体 | 第13-18页 |
| ·人体纤溶系统及D-二聚体生成 | 第13-14页 |
| ·D-二聚体检测方法 | 第14-15页 |
| ·胶乳凝集法 | 第14页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA)法 | 第14-15页 |
| ·光电散射比浊法 | 第15页 |
| ·胶体金免疫渗透试验 | 第15页 |
| ·检测方法的比较 | 第15页 |
| ·D-二聚体的临床应用 | 第15-18页 |
| ·静脉血栓 | 第16页 |
| ·弥散性血管内凝血 | 第16-17页 |
| ·急性脑梗死 | 第17页 |
| ·肿瘤辅助诊断 | 第17页 |
| ·外科手术引发的血栓形成 | 第17页 |
| ·急性主动脉夹层分离 | 第17-18页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第18-25页 |
| ·免疫胶体金基本原理 | 第18-19页 |
| ·胶体金制备方法 | 第19-21页 |
| ·鞣酸—枸橼酸钠还原法 | 第19页 |
| ·枸橼酸三钠还原法 | 第19-20页 |
| ·柠檬酸三钠还原法 | 第20页 |
| ·硼氢化钠还原法 | 第20页 |
| ·乙醇-超声波还原法 | 第20-21页 |
| ·胶体金的稳定性 | 第21页 |
| ·胶体金在免疫检验中的应用 | 第21-22页 |
| ·免疫层析快速检测技术 | 第21-22页 |
| ·凝集试验 | 第22页 |
| ·免疫印迹技术 | 第22页 |
| ·胶体金-蛋白质复合物的制备 | 第22-25页 |
| ·蛋白质的处理 | 第22-23页 |
| ·蛋白质最适用量的选择 | 第23页 |
| ·蛋白质的胶体金标记 | 第23-24页 |
| ·胶体金标记蛋白的纯化方法 | 第24-25页 |
| ·荧光免疫技术 | 第25-28页 |
| ·荧光产生的基本原理 | 第25页 |
| ·荧光光谱的特征 | 第25-26页 |
| ·Stokes 位移 | 第25页 |
| ·荧光发射光谱的形状与激发波长无关 | 第25页 |
| ·荧光猝灭 | 第25页 |
| ·蛋白质内源荧光 | 第25-26页 |
| ·荧光免疫的基本原理 | 第26页 |
| ·荧光免疫分析的分类 | 第26-28页 |
| ·荧光偏振免疫分析法 | 第26-27页 |
| ·时间分辨荧光免疫分析法 | 第27-28页 |
| 本文研究目的及意义 | 第28-29页 |
| 第二章 试纸条制备 | 第29-36页 |
| ·实验材料和仪器 | 第29页 |
| ·材料的选择 | 第29-30页 |
| ·二聚体单克隆抗体 | 第29页 |
| ·样品垫材料 | 第29页 |
| ·金标垫材料 | 第29页 |
| ·硝酸纤维素膜 | 第29-30页 |
| ·吸收垫材料 | 第30页 |
| ·试纸条材料的处理 | 第30-32页 |
| ·金标垫材料的处理 | 第30页 |
| ·样品垫材料的处理 | 第30-32页 |
| ·处理前的试纸条实验 | 第31页 |
| ·处理后的试纸条实验 | 第31-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-34页 |
| ·金标垫的处理方法研究 | 第32页 |
| ·样品垫的处理方法研究 | 第32-33页 |
| ·纤维素膜上抗体浓度的确定 | 第33-34页 |
| ·检测线抗体浓度的确定 | 第33页 |
| ·质控线抗体浓度的确定 | 第33-34页 |
| ·试纸条的组装 | 第34页 |
| ·本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章胶体金法 D-二聚体试剂盒的研制 | 第36-58页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第36-37页 |
| ·实验试剂 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法的建立 | 第37页 |
| ·胶体金制备 | 第37-44页 |
| ·胶体金制备方法筛选 | 第37-39页 |
| ·冷却法 | 第37-38页 |
| ·壳聚糖法 | 第38页 |
| ·柠檬酸三钠法 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| ·制备高质量胶体金的注意事项 | 第40页 |
| ·玻璃容器的清洁 | 第40页 |
| ·试剂、水质和环境 | 第40页 |
| ·pH 值的调节 | 第40页 |
| ·胶体金稳定性试验 | 第40-41页 |
| ·胶体金的粒径控制 | 第41-44页 |
| ·少量柠檬酸三钠的影响 | 第42页 |
| ·多量柠檬酸三钠的影响 | 第42-44页 |
| ·胶体金对蛋白质的标记 | 第44-49页 |
| ·标记方法 | 第44页 |
| ·蛋白质最适用量的确定 | 第44页 |
| ·胶体金蛋白结合物的表征 | 第44-47页 |
| ·紫外吸收 | 第44-45页 |
| ·电镜扫描 | 第45页 |
| ·粒度分布 | 第45-47页 |
| ·胶体金与抗体结合的稳定性研究 | 第47-49页 |
| ·稳定剂的选择 | 第47页 |
| ·离子强度及盐溶液的影响 | 第47页 |
| ·pH 值的影响 | 第47-48页 |
| ·缓冲溶液的影响 | 第48-49页 |
| ·试剂盒检测条件的筛选 | 第49-52页 |
| ·胶体金-蛋白质最适浓度的确定 | 第49-50页 |
| ·最适浓度范围的筛选 | 第49页 |
| ·紫外扫描 | 第49-50页 |
| ·假阳性的排除 | 第50-52页 |
| ·pH 值 | 第50页 |
| ·BSA 阻断剂 | 第50-51页 |
| ·抗体蛋白质 | 第51页 |
| ·离心浓缩 | 第51-52页 |
| ·缓冲液中NaCl 的影响 | 第52页 |
| ·试剂盒检测性能的考察 | 第52-57页 |
| ·拟合实验 | 第52-54页 |
| ·重复性试验 | 第54-55页 |
| ·灵敏度实验 | 第55-56页 |
| ·稳定性实验 | 第56-57页 |
| ·干扰性试验 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 荧光素法 D-二聚体试剂盒的研制 | 第58-73页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第58页 |
| ·实验试剂 | 第58页 |
| ·实验仪器 | 第58页 |
| ·实验方法的建立 | 第58-60页 |
| ·荧光染料对蛋白质的标记 | 第60-62页 |
| ·荧光体Cy5 | 第60页 |
| ·Cy5-蛋白质复合物的制备 | 第60-61页 |
| ·Cy5-蛋白质的纯化 | 第61-62页 |
| ·透析膜的前处理 | 第61-62页 |
| ·纯化方法 | 第62页 |
| ·标记度公式的推导 | 第62页 |
| ·检测条件的筛选 | 第62-68页 |
| ·蛋白质最适标记量的确定 | 第62-64页 |
| ·CRP 预实验 | 第62-63页 |
| ·Cy5 标记 DD2 | 第63-64页 |
| ·缓冲液中NaCl 的影响 | 第64-66页 |
| ·Cy5-蛋白质最适浓度的确定 | 第66-68页 |
| ·检测性能的考察 | 第68-72页 |
| ·拟合实验 | 第68-69页 |
| ·重复性实验 | 第69-70页 |
| ·灵敏度实验 | 第70-71页 |
| ·稳定性实验 | 第71-72页 |
| ·干扰性试验 | 第72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第81-82页 |
