| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一部分 ：lnc RNA-UCA1 通过 mi R-7-5p/EGFR 途径促进低氧耐性胃癌细胞迁移 | 第18-40页 |
| 1 前言 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1 试剂 | 第20页 |
| 2.2 仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.3.1 细胞培养与低氧耐性胃癌细胞系的建立 | 第21页 |
| 2.3.2 Transwell实验 | 第21-22页 |
| 2.3.3 实时定量PCR(Real-TimePCR) | 第22-23页 |
| 2.3.4 脂质体介导siRNA,mimic及inhibitor转染 | 第23页 |
| 2.3.5 RNA结合蛋白免疫共沉降实验(RNAImmunoprecipitation) | 第23-25页 |
| 2.3.6 质粒构建 | 第25-26页 |
| 2.3.7 双荧光素酶报告基因实验 | 第26页 |
| 2.3.8 Westernblot检测蛋白水平 | 第26-27页 |
| 2.3.9 生物信息学预测 | 第27页 |
| 2.3.10 GEO数据获得及分析 | 第27-28页 |
| 2.3.11 RNA核浆分离实验 | 第28页 |
| 2.3.12 miRNA表达谱芯片及lncRNA测序 | 第28页 |
| 2.3.13 统计学分析 | 第28-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-38页 |
| 3.1 低氧耐性胃癌细胞系迁移能力增强 | 第29页 |
| 3.2 低氧耐性胃癌细胞中lncRNA-UCA1上调并促进其迁移能力增强 | 第29-31页 |
| 3.3 低氧耐性胃癌细胞中UCA1吸附结合miR-7-5p | 第31-33页 |
| 3.4 miR-7-5p靶向低氧耐性胃癌细胞中的EGFR | 第33-34页 |
| 3.5 miR-7-5p/EGFR轴抑制低氧耐性胃癌细胞迁移 | 第34-35页 |
| 3.6 UCA1通过抑制mir-7-5p/EGFR轴调控低氧耐性胃癌细胞的迁移 | 第35-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 第二部分 ：lncRNA-UCA1通过介导PTBP1/PKM2通路促进低氧耐性胃癌细胞迁移 | 第40-65页 |
| 1 前言 | 第40-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-50页 |
| 2.1 试剂 | 第41页 |
| 2.2 仪器 | 第41-42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-50页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第42页 |
| 2.3.2 Transwell法进行细胞迁移能力检测 | 第42页 |
| 2.3.3 脂质体介导shRNA转染 | 第42-43页 |
| 2.3.4 实时定量PCR(Real-TimePCR) | 第43-44页 |
| 2.3.5 Westernblot检测蛋白水平 | 第44-45页 |
| 2.3.6 RNApulldown实验 | 第45-49页 |
| 2.3.7 乳酸测定实验 | 第49页 |
| 2.3.8 蛋白核浆分离实验 | 第49页 |
| 2.3.9 PKM2蛋白交联实验 | 第49页 |
| 2.3.10 RNA结合蛋白免疫共沉降实验(RNAImmunoprecipitation) | 第49页 |
| 2.3.11 统计学分析 | 第49-50页 |
| 3 实验结果 | 第50-61页 |
| 3.1 低氧耐性胃癌细胞糖酵解功能增强,敲减UCA1抑制其糖酵解 | 第50页 |
| 3.2 RNApulldown实验联合质谱分析检测UCA1相关结合蛋白 | 第50-53页 |
| 3.3 lncRNA-UCA1与PKM2结合并促进PKM2表达 | 第53-54页 |
| 3.4 lncRNA-UCA1促进PKM2单体核转位 | 第54-56页 |
| 3.5 PKM2单体聚合逆转UCA1促进细胞迁移的作用 | 第56-58页 |
| 3.6 lncRNA-UCA1与PTBP1结合并影响PKM可变剪切过程 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 综述 | 第74-86页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 个人简介 | 第88页 |
