| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第16-32页 |
| 一、皮肤癌概述 | 第16-19页 |
| 1 皮肤癌的发病原因及发病机制 | 第16-18页 |
| 1.1 皮肤癌的发病原因 | 第16-17页 |
| 1.2 皮肤癌的发病机制 | 第17-18页 |
| 2 皮肤癌的治疗 | 第18-19页 |
| 二、Neuropilin-1概述 | 第19-29页 |
| 1 NRP-1的结构及其异构体 | 第19-21页 |
| 2 NRP-1的表达 | 第21-22页 |
| 3 NRP-1的配体与共受体 | 第22-26页 |
| 3.1 Plexin和semaphorin | 第23页 |
| 3.2 VEGF和VEGFR | 第23-24页 |
| 3.3 TGF-p和TGFR | 第24页 |
| 3.4 FGF、HGF和c-Met | 第24页 |
| 3.5 PDGF和PDGFR | 第24-25页 |
| 3.6 EGF和EFGR | 第25页 |
| 3.7 Fibronectin和Integrin | 第25-26页 |
| 4 NRP-1的功能 | 第26-29页 |
| 4.1 NRP-1与血管生成 | 第26-27页 |
| 4.2 NRP-1与神经发育 | 第27-28页 |
| 4.3 NRP-1与肿瘤的发生发展 | 第28页 |
| 4.4 NRP-1与免疫调节 | 第28-29页 |
| 5 靶向NRP-1的药物 | 第29页 |
| 三、NRP-1在皮肤癌中研究进展 | 第29-30页 |
| 四、研究目的和内容 | 第30-32页 |
| 第一章 NRP-1 mAb的制备、纯化及鉴定 | 第32-44页 |
| 一、材料和方法 | 第32-41页 |
| 1 材料 | 第32-37页 |
| 1.1 细胞株和实验动物 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第32-33页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第33页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第33-37页 |
| 2 方法 | 第37-41页 |
| 2.1 杂交瘤细胞培养 | 第37-38页 |
| 2.2 抗体的生产 | 第38页 |
| 2.3 抗体的纯化 | 第38-39页 |
| 2.4 抗体的透析和冻干 | 第39页 |
| 2.5 抗体的纯度鉴定 | 第39-40页 |
| 2.6 抗体的浓度测定 | 第40页 |
| 2.7 抗体的滴度鉴定 | 第40-41页 |
| 二、结果与分析 | 第41-43页 |
| 1 纯度测定 | 第41-42页 |
| 2 滴度测定 | 第42-43页 |
| 三、讨论 | 第43-44页 |
| 第二章 NRP-1在皮肤癌细胞株及皮肤癌组织中的表达 | 第44-54页 |
| 一、材料和方法 | 第44-49页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1 细胞株 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第44页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第44-45页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| 2.1 流式细胞术 | 第45-46页 |
| 2.2 Western blotting | 第46-47页 |
| 2.3 细胞免疫荧光染色 | 第47-48页 |
| 2.4 免疫组织化学染色 | 第48-49页 |
| 二、结果与分析 | 第49-53页 |
| 1 流式细胞术 | 第49-50页 |
| 2 Western blotting | 第50页 |
| 3 细胞免疫荧光染色 | 第50-51页 |
| 4 免疫组织化学染色 | 第51-53页 |
| 三、讨论 | 第53-54页 |
| 第三章 NRP-1 mAb对皮肤癌细胞的生长抑制作用 | 第54-67页 |
| 一、材料和方法 | 第54-58页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| 1.1 细胞株 | 第54页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第54页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第54-55页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-58页 |
| 2.1 细胞计数 | 第55-56页 |
| 2.2 细胞生长抑制试验 | 第56页 |
| 2.3 集落形成抑制实验 | 第56-57页 |
| 2.4 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第57页 |
| 2.5 荧光显微镜法观察细胞凋亡 | 第57-58页 |
| 2.6 统计学处理 | 第58页 |
| 二、结果与分析 | 第58-65页 |
| 1 抗NRP-1抗体抑制细胞增殖 | 第58-63页 |
| 1.1 普通显微镜法观察细胞形态变化 | 第58-60页 |
| 1.2 MTT法 | 第60-62页 |
| 1.3 集落形成抑制实验 | 第62-63页 |
| 2 抗NRP-1抗体促进细胞凋亡 | 第63-65页 |
| 2.1 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第63-65页 |
| 2.2 荧光显微镜法观察细胞凋亡 | 第65页 |
| 三、讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 NRP-1 mAb对皮肤癌细胞生长抑制作用机制 | 第67-75页 |
| 一、材料和方法 | 第67-68页 |
| 1 材料 | 第67-68页 |
| 1.1 细胞株 | 第67页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第67页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第67页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第67-68页 |
| 2 方法 | 第68页 |
| 二、结果与分析 | 第68-71页 |
| 1 凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2的表达 | 第68-70页 |
| 2 增殖相关蛋白PI3K(85)、p-Akt和p-ERK1/2的表达 | 第70-71页 |
| 三、讨论 | 第71-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 本文存在的问题及今后应开展的研究 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 研究生在学期间发表的主要学术论文目录 | 第92页 |
