| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| Table of Contents | 第12-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-32页 |
| 1.1 心肌分化的调控 | 第18-20页 |
| 1.1.1 转录因子 | 第18-19页 |
| 1.1.2 细胞因子 | 第19页 |
| 1.1.3 化学诱导剂 | 第19-20页 |
| 1.2 RNA结合蛋白 | 第20-26页 |
| 1.2.1 RNA结合蛋白的结构 | 第20-21页 |
| 1.2.2 RNA结合蛋白的功能 | 第21-22页 |
| 1.2.3 RBPs与心肌分化的关系 | 第22-26页 |
| 1.2.3.1 心脏管的形成 | 第23页 |
| 1.2.3.2 心肌分化和肌原纤维形成 | 第23-25页 |
| 1.2.3.3 心脏形态发生 | 第25页 |
| 1.2.3.4 出生后心脏的成熟 | 第25-26页 |
| 1.2.3.5 发育失调和疾病 | 第26页 |
| 1.3 Rbm24基因 | 第26-32页 |
| 1.3.1 Rbm24基因的结构 | 第26-28页 |
| 1.3.2 Rbm24基因的功能 | 第28-29页 |
| 1.3.3 Rbm24基因研究进展 | 第29-32页 |
| 1.3.3.1 Rbm24与p63 | 第30页 |
| 1.3.3.2 Rbm24与p21 | 第30页 |
| 1.3.3.3 Rbm24与MYOD | 第30-31页 |
| 1.3.3.4 Rbm24与MYOG | 第31-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第32页 |
| 2.1.2 新生小鼠 | 第32页 |
| 2.1.3 菌种和载体 | 第32页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第32-33页 |
| 2.2 主要仪器与耗材 | 第33-34页 |
| 2.3 主要试剂 | 第34-37页 |
| 2.4 实验内容与方法 | 第37-57页 |
| 2.4.1 基因真核表达质粒的构建 | 第37-44页 |
| 2.4.1.1 总RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.4.1.2 RNA反转录合成cDNA模板 | 第38页 |
| 2.4.1.3 由cDNA为模板PCR扩增目的基因 | 第38-39页 |
| 2.4.1.4 PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 2.4.1.5 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第40页 |
| 2.4.1.6 DNA限制性内切酶酶切DNA片段和载体片段 | 第40-41页 |
| 2.4.1.7 从酶切反应液中回收DNA | 第41-42页 |
| 2.4.1.8 载体去磷酸化处理 | 第42页 |
| 2.4.1.9 DNA片段和载体的连接 | 第42页 |
| 2.4.1.10 连接物转化 | 第42-43页 |
| 2.4.1.11 质粒DNA小量提取 | 第43-44页 |
| 2.4.2 原代心肌细胞制备 | 第44-45页 |
| 2.4.3 细胞培养 | 第45-47页 |
| 2.4.3.1 细胞复苏 | 第45-46页 |
| 2.4.3.2 细胞传代 | 第46页 |
| 2.4.3.3 细胞冻存 | 第46-47页 |
| 2.4.3.4 细胞计数 | 第47页 |
| 2.4.4 细胞转染 | 第47-48页 |
| 2.4.4.1 PEI转染法 | 第47-48页 |
| 2.4.4.2 X-tremeGENE HP DNA转染试剂转染法 | 第48页 |
| 2.4.5 提取细胞总蛋白 | 第48-49页 |
| 2.4.6 BCA法检测蛋白浓度 | 第49页 |
| 2.4.7 Western Blot免疫印迹分析 | 第49-50页 |
| 2.4.8 细胞免疫荧光染色 | 第50-51页 |
| 2.4.9 免疫共沉淀CO-IP | 第51-52页 |
| 2.4.10 银染 | 第52-54页 |
| 2.4.11 RIP-PCR | 第54-55页 |
| 2.4.12 定量逆转录-聚合酶链反应qRT-PCR | 第55页 |
| 2.4.13 核质分离 | 第55-56页 |
| 2.4.14 统计学分析 | 第56-57页 |
| 第三章 结果与分析 | 第57-93页 |
| 3.1 Rbm24在心肌组织的表达 | 第57-64页 |
| 3.1.1 Rbm24在ESC分化中的表达 | 第57-58页 |
| 3.1.2 原代心肌细胞 | 第58-60页 |
| 3.1.2.1 原代心肌细胞制备 | 第58-59页 |
| 3.1.2.2 Rbm24在原代心肌细胞的表达 | 第59-60页 |
| 3.1.3 Rbm24在心肌母细胞H9C2的表达及核质分布 | 第60-62页 |
| 3.1.4 Rbm24在C2C12细胞系的表达 | 第62-64页 |
| 3.2 Rbm24在心肌细胞中的敲低分析 | 第64-66页 |
| 3.3 稳定过表达Rbm24-Flag细胞株的建立与鉴定 | 第66-68页 |
| 3.3.1 稳定过表达Rbm24-Flag细胞株的建立 | 第66-67页 |
| 3.3.2 免疫荧光观察重组质粒Rbm24-Flag在H9C2细胞中的定位 | 第67-68页 |
| 3.4 RIP-CHIP筛选与Rbm24相结合的mRNA | 第68-84页 |
| 3.5 免疫共沉淀CO-IP筛选与Rbm24相结合的蛋白 | 第84-93页 |
| 3.5.1 CO-IP样品质谱分析 | 第85-91页 |
| 3.5.2 pXJ40-Myc-Ybx1表达质粒的构建 | 第91-93页 |
| 第四章 讨论 | 第93-97页 |
| 第五章 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
