| 致谢 | 第5-6页 |
| 前言 | 第6-13页 |
| 摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-18页 |
| 缩略词表 | 第19-25页 |
| 1 脑血管内皮细胞缺血损伤后脯氨酸异构酶FKBP25变化规律研究 | 第25-50页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第25-30页 |
| 1.1.1 细胞株 | 第25-26页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第27-28页 |
| 1.1.4 溶液配制 | 第28-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-37页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第30-31页 |
| 1.2.2 构建诱导血管内皮细胞损伤缺糖缺氧(Oxygen glucosedeprivation, OGD)模型 | 第31页 |
| 1.2.3 细胞总蛋白提取和定量 | 第31-32页 |
| 1.2.4 细胞核蛋白提取 | 第32页 |
| 1.2.5 蛋白质免疫印迹 | 第32-33页 |
| 1.2.6 细胞免疫荧光 | 第33页 |
| 1.2.7 Time-lapse记录细胞反应 | 第33-34页 |
| 1.2.8 免疫共沉淀 | 第34页 |
| 1.2.9 Trizol法提取RNA | 第34-35页 |
| 1.2.10 RNA逆转录 | 第35页 |
| 1.2.11 质粒构建 | 第35-36页 |
| 1.2.12 慢病毒构建及包装 | 第36页 |
| 1.2.13 统计学分析 | 第36-37页 |
| 1.3 实验结果 | 第37-48页 |
| 1.3.1 脑血管内皮细胞缺氧低糖损伤过程中脯氨酸异构酶FKBP25的变化规律 | 第37-40页 |
| 1.3.2 硝化应激信号诱导脑血管内皮细胞FKBP25发生核转移 | 第40-41页 |
| 1.3.3 FKBP25蛋白N段1-108氨基酸序列影响其在细胞中的定 | 第41-44页 |
| 1.3.4 与FKBP25相互作用的蛋白的发现及确认 | 第44-48页 |
| 1.4 讨论 | 第48-49页 |
| 1.5 小结 | 第49-50页 |
| 2 FKBP25调控可干预脑缺血引起的神经血管单元损伤 | 第50-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 2.1.1 细胞培养 | 第51页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第51页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第51页 |
| 2.1.4 慢病毒构建 | 第51-52页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第52页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第52-53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-56页 |
| 2.2.1 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第53页 |
| 2.2.2 小鼠脑室慢病毒注射 | 第53-54页 |
| 2.2.3 小鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型(transient middle cerebral arteryocclusion, tMCAO) | 第54页 |
| 2.2.4 小鼠神经功能障碍评分 | 第54页 |
| 2.2.5 脑组织免疫荧光 | 第54-56页 |
| 2.3 实验结果 | 第56-65页 |
| 2.3.1 FKBP25过表达可改善OGD引起的血管内皮细胞凋亡 | 第56-58页 |
| 2.3.2 慢病毒过表达FKBP25对缺血性脑损伤的保护作用研究 | 第58-65页 |
| 2.4 讨论 | 第65-66页 |
| 2.5 小结 | 第66-67页 |
| 3 FKBP25对脑内神经元钙通道电流的作用 | 第67-85页 |
| 3.1 实验材料 | 第67-71页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第67-68页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第68页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第68-69页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第69-71页 |
| 3.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 3.2.1 急性脑片的准备 | 第71页 |
| 3.2.2 电生理记录 | 第71-73页 |
| 3.2.3 数据统计与分析 | 第73-74页 |
| 3.3 实验结果 | 第74-83页 |
| 3.3.1 脯氨酸异构酶FKBP25重组蛋白抑制神经元钙通道电流 | 第74-78页 |
| 3.3.2 FKBP25对神经元钙通道电流的抑制作用主要由L-型钙通道介导 | 第78-81页 |
| 3.3.3 FKBP25蛋白截断体106-224氨基酸序列决定其在神经元中的作用 | 第81-83页 |
| 3.4 讨论 | 第83-84页 |
| 3.5 小结 | 第84-85页 |
| 4 对脯氨酸异构酶实现快速可视化的荧光探针研究 | 第85-103页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第86-88页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第86页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第86-87页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第87页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第87-88页 |
| 4.2 实验方法 | 第88-91页 |
| 4.2.1 大肠杆菌蛋白裂解 | 第88页 |
| 4.2.2 细胞裂解液 | 第88-89页 |
| 4.2.3 考马斯亮蓝凝胶染色 | 第89页 |
| 4.2.4 双酶偶联法检测脯氨酸异构酶活性 | 第89-90页 |
| 4.2.5 荧光探针测定脯氨酸异构酶活性 | 第90页 |
| 4.2.6 Time-lapse记录细胞荧光值变化 | 第90-91页 |
| 4.3 实验结果 | 第91-101页 |
| 4.3.1 双酶偶联法体外检测脯氨酸异构酶FKBP25活性 | 第91-93页 |
| 4.3.2 荧光探针的设计理念及基本特性 | 第93-95页 |
| 4.3.3 小分子荧光探针对脯氨酸异构酶重组蛋白和细胞蛋白裂解液的反应敏感性 | 第95-97页 |
| 4.3.4 脯氨酸异构酶荧光探针的特异性研究 | 第97-98页 |
| 4.3.5 活细胞中荧光探针对脯氨酸异构酶的荧光响应变化 | 第98-100页 |
| 4.3.6 荧光探针对血管内皮细胞FKBP25过表达的荧光反应 | 第100-101页 |
| 4.4 讨论 | 第101-102页 |
| 4.5 小结 | 第102-103页 |
| 总结与展望 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-111页 |
| 综述 | 第111-128页 |
| 参考文献 | 第122-128页 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第128-129页 |
