| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 符号与缩略语说明 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一部分 文献综述部分 | 第16-40页 |
| 第一节 红球菌分类鉴定及其应用研究的概述 | 第16-25页 |
| 1 红球菌的分类简史 | 第16页 |
| 2 红球菌分类鉴定 | 第16-20页 |
| 2.1 常见分类鉴定方法在红球菌中的应用 | 第17-19页 |
| 2.2 红球菌分类鉴定的重要性 | 第19-20页 |
| 3 红球菌生物降解和转化的应用价值 | 第20-24页 |
| 3.1 生物降解和生物修复 | 第20-23页 |
| 3.2 红球菌其他方面的应用 | 第23-24页 |
| 4 红球菌的基因组学研究进展 | 第24-25页 |
| 第二节 多菌灵污染及其降解研究的概述 | 第25-40页 |
| 1 多菌灵简介 | 第25-26页 |
| 2 多菌灵残留的情况及相关标准 | 第26页 |
| 3 多菌灵的检测方法 | 第26-27页 |
| 4 多菌灵对非靶标生物的危害 | 第27-28页 |
| 4.1 多菌灵对动物的影响 | 第27-28页 |
| 4.2 多菌灵对植物的影响 | 第28页 |
| 4.3 多菌灵对土壤微生物的影响 | 第28页 |
| 5 多菌灵的降解研究 | 第28-31页 |
| 5.1 光化学催化降解 | 第28-29页 |
| 5.2 多菌灵在动植物中的降解及其途径概述 | 第29-30页 |
| 5.3 微生物对多菌灵的降解 | 第30-31页 |
| 6 多菌灵微生物降解研究及应用存在的问题 | 第31-33页 |
| 参考文献 | 第33-40页 |
| 第二部分 实验部分 | 第40-132页 |
| 第一章 多菌灵降解菌株djl-6-2分类地位研究 | 第40-64页 |
| 1 材料与方法 | 第40-48页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第40-41页 |
| 1.2 形态学、生理生化指标测定 | 第41-42页 |
| 1.3 菌株细胞壁脂肪酸分析 | 第42-43页 |
| 1.4 枝菌酸的分析 | 第43页 |
| 1.5 醌组分分析 | 第43页 |
| 1.6 磷酯组分分析 | 第43-44页 |
| 1.7 氨基酸、糖组分析 | 第44-45页 |
| 1.8 菌株基因型特征分析 | 第45-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-58页 |
| 2.1 菌株djl-6-2生理生化分析 | 第48页 |
| 2.2 菌株djl-6-2 API分析 | 第48-50页 |
| 2.3 菌株djl-6-2醌组分分析 | 第50页 |
| 2.4 菌株djl-6-2枝菌酸分析 | 第50-51页 |
| 2.5 菌株djl-6-2磷脂类型分析 | 第51-52页 |
| 2.6 菌株djl-6-2全细胞壁氨基酸和全细胞糖类型分析 | 第52页 |
| 2.7 菌株djl-6-2细胞壁脂肪酸分析 | 第52-54页 |
| 2.8 菌株djl-6-2与已报道的模式菌株的表型差异比较 | 第54-56页 |
| 2.9 菌株基因型特征分析 | 第56-58页 |
| 本章讨论 | 第58-59页 |
| 本章小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 第二章 菌株djl-6-2对多菌灵降解的研究 | 第64-90页 |
| 第一节 菌株djl-6-2降解多菌灵的特性研究 | 第64-71页 |
| 1 材料与方法 | 第64-66页 |
| 1.1 供试菌株、培养基、试剂 | 第64-65页 |
| 1.2 仪器 | 第65页 |
| 1.3 菌体的培养与生长量的测定 | 第65页 |
| 1.4 菌株djl-6-2对多菌灵降解特性的研究 | 第65-66页 |
| 1.5 多菌灵提取测定方法 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-71页 |
| 2.1 菌株djl-6-2利用多菌灵作为唯一碳氮源的研究 | 第66-67页 |
| 2.2 多菌灵初始浓度对菌株djl-6-2降解多菌灵的影响 | 第67-68页 |
| 2.3 接种量对菌株djl-6-2降解多菌灵的影响 | 第68-69页 |
| 2.4 温度对菌株djl-6-2降解多菌灵的影响 | 第69页 |
| 2.5 pH对菌株djl-6-2降解多菌灵的影响 | 第69-71页 |
| 第二节 多菌灵降解酶定性检测和粗酶液反应体系研究 | 第71-80页 |
| 1 材料与方法 | 第71-74页 |
| 1.1 菌种、培养基与试剂 | 第71页 |
| 1.2 主要仪器 | 第71页 |
| 1.3 菌株的培养及菌体保藏 | 第71-72页 |
| 1.4 粗酶液的制备 | 第72页 |
| 1.5 粗酶液酶活定性检测方法的建立 | 第72页 |
| 1.6 粗酶液酶活定量测定方法 | 第72页 |
| 1.7 多菌灵降解酶的定域 | 第72-73页 |
| 1.8 多菌灵降解酶的诱导情况试验 | 第73页 |
| 1.9 菌株生长曲线和产酶曲线 | 第73页 |
| 1.10 酶的热稳定性和温度对酶促降解的影响 | 第73页 |
| 1.11 酶的酸碱稳定性和pH对酶促降解的影响 | 第73-74页 |
| 1.12 表面活性剂和酶抑制剂对酶活性的影响 | 第74页 |
| 1.13 蛋白质含量的测定 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-80页 |
| 2.1 粗酶液酶活定性检测方法的建立 | 第74-75页 |
| 2.2 粗酶制备方法提取效率的比较 | 第75-76页 |
| 2.3 多菌灵降解酶的诱导情况 | 第76页 |
| 2.4 降解酶的定域 | 第76-77页 |
| 2.5 菌株生长曲线和产酶曲线 | 第77页 |
| 2.6 pH对多菌灵降解酶的影响 | 第77-78页 |
| 2.7 温度对降解酶的影响 | 第78页 |
| 2.8 金属离子、表面活性剂和酶抑制剂对酶活性的影响 | 第78-80页 |
| 第三节 多菌灵代谢产物的色谱分析 | 第80-85页 |
| 1 材料与方法 | 第80-81页 |
| 1.1 供试菌株、培养基、试剂 | 第80页 |
| 1.2 代谢产物提取 | 第80页 |
| 1.3 仪器、及分析方法 | 第80-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-85页 |
| 2.1 多菌灵代谢产物的HPLC初步检测 | 第81页 |
| 2.2 质谱检测及解读 | 第81-85页 |
| 2.3 多菌灵代谢产物途径的初步确定 | 第85页 |
| 本章讨论 | 第85页 |
| 本章小结 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 第三章 2-氨基苯并咪唑降解机理的研究 | 第90-114页 |
| 第一节 2-氨基和2-羟基苯并咪唑的降解研究 | 第90-103页 |
| 1 材料与方法 | 第90-93页 |
| 1.1 供试菌株、培养基、试剂和仪器 | 第90页 |
| 1.2 菌体的培养与接种、催化 | 第90-91页 |
| 1.3 2-氨基苯并咪唑降解条件的影响实验 | 第91-92页 |
| 1.4 反应体系的底物残留提取 | 第92-93页 |
| 1.5 2-氨基苯并咪唑的测定和计算 | 第93页 |
| 1.6 双加氧酶的酶活测定 | 第93页 |
| 1.7 全细胞催化和粗酶对2-氨基苯并咪唑的影响 | 第93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-103页 |
| 2.1 不同培养基对2-AB的影响 | 第93-95页 |
| 2.2 NH_4NO_3浓度对菌株djl-6-2降解2-氨基苯并咪唑的影响 | 第95页 |
| 2.3 温度对菌株djl-6-2降解2-氨基苯并咪唑的影响 | 第95-96页 |
| 2.4 pH对菌株djl-6-2降解2-氨基苯并咪唑的影响 | 第96-97页 |
| 2.5 接种量对菌株djl-6-2降解2-氨基苯并咪唑的影响 | 第97-98页 |
| 2.6 金属离子对菌株djl-6-2降解2-氨基苯并咪唑的影响 | 第98页 |
| 2.7 高浓度2-氨基苯并咪唑的降解催化 | 第98-99页 |
| 2.8 低浓度2-氨基苯并咪唑的降解 | 第99-100页 |
| 2.9 2-羟基苯并咪唑浓度对降解的影响 | 第100页 |
| 2.10 添加3-FC对2-羟基苯并咪唑降解的影响 | 第100-101页 |
| 2.11 双加氧酶活性的诱导、测定 | 第101页 |
| 2.12 全细胞催化和粗酶对2-氨基苯并咪唑的影响 | 第101-103页 |
| 第二节 2-氨基苯并咪唑的代谢产物质谱分析 | 第103-109页 |
| 1 材料和方法 | 第103页 |
| 1.1 供试菌株、培养基、试剂和仪器 | 第103页 |
| 1.2 全细胞催化方法 | 第103页 |
| 1.3 代谢产物提取方法 | 第103页 |
| 1.4 代谢产物分析方法 | 第103页 |
| 2 结果与分析 | 第103-109页 |
| 2.1 2-氨基苯并咪唑全细胞催化代谢产物分析 | 第103-107页 |
| 2.2 2-氨基苯并咪唑开环物质的推断 | 第107页 |
| 2.3 苯并咪唑的全细胞催化代谢产物分析 | 第107-108页 |
| 2.4 苯并咪唑类化合物代谢途径推测 | 第108-109页 |
| 本章讨论 | 第109-111页 |
| 本章小结 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-114页 |
| 第四章 外二元醇双加氧酶基因克隆及其表达产物对2-羟基苯并咪唑降解的影响 | 第114-132页 |
| 第一节 外二元醇双加氧酶(Extradiol Dioxygenases)的基因克隆 | 第114-123页 |
| 1 材料和方法 | 第114-118页 |
| 1.1 培养基、试剂与仪器 | 第114页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第114-115页 |
| 1.3 菌体总DNA的小量提取 | 第115页 |
| 1.4 质粒DNA的小量提取 | 第115页 |
| 1.5 感受态的制备及转化方法 | 第115-116页 |
| 1.6 PCR扩增外二元醇双加氧酶基因片段 | 第116-117页 |
| 1.7 PCR产物的T/A克隆与转化 | 第117页 |
| 1.8 序列测定、比较与分析 | 第117页 |
| 1.9 阳性克隆的验证 | 第117-118页 |
| 2 结果分析 | 第118-123页 |
| 2.1 PCR法克隆外二元醇双加氧酶基因片段 | 第118-119页 |
| 2.2 菌株djl-6-2的外二元醇双加氧酶基因(edo)全长克隆 | 第119页 |
| 2.3 序列测定与比较分析 | 第119-121页 |
| 2.4 阳性克隆的功能再验证 | 第121-123页 |
| 第二节 外二元醇双加氧酶(EDO)的表达及对2-羟基苯并咪唑降解的影响 | 第123-128页 |
| 1 材料和方法 | 第123-125页 |
| 1.1 培养基、试剂与仪器 | 第123页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第123页 |
| 1.3 质粒提取 | 第123页 |
| 1.4 外二元醇双加氧酶EDO表达载体的构建与表达 | 第123-124页 |
| 1.5 阳性克隆筛选 | 第124页 |
| 1.6 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第124-125页 |
| 1.7 edo表达产物EDO对2-羟基苯并咪唑的降解影响实验 | 第125页 |
| 2 结果分析 | 第125-128页 |
| 2.1 外二元醇双加氧酶基因(edo)表达载体的构建 | 第125-126页 |
| 2.2 edo基因在E coli BL21(DE3)中的表达 | 第126-127页 |
| 2.3 外二元醇双加氧酶对2-羟基苯并咪唑降解的影响 | 第127-128页 |
| 本章讨论 | 第128-129页 |
| 本章小结 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-132页 |
| 全文总结 | 第132-134页 |
| 博士论文创新点 | 第134-136页 |
| 附录1 培养基及试剂配方 | 第136-140页 |
| 附录2 16S rRNA序列 | 第140-142页 |
| 附录3 菌株djl-6-2与模式种的系统发育树 | 第142-144页 |
| 附录4 家玲红球菌djl-6-2的EDO基因序列 | 第144-146页 |
| 附录5 家玲红球菌djl-6-2保藏证明(1) | 第146-148页 |
| 附录6 家玲红球菌djl-6-2保藏证明(2) | 第148-150页 |
| 发表文章 | 第150-152页 |
| 致谢 | 第152页 |
