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棉花水通道蛋白基因(GhAQP)和囊泡膜相关蛋白基因(GhVAMP)的鉴定及功能的初步分析

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-10页
缩略词表第11-13页
第一部分 文献综述第13-45页
    第一章 棉纤维发育过程的研究第13-17页
        1 起始分化期第14页
        2 伸长期/初生壁形成期第14-15页
        3 次生壁合成期第15-16页
        4 成熟期第16-17页
    第二章 cDNA末端快速扩增技术第17-23页
        1 3'RACE的技术原理第17-18页
        2 5'RACE的技术原理第18页
        3 RACE技术的优点和缺点第18-19页
        4 RACE技术的注意事项第19-21页
            4.1 3'RACE技术应注意事项第19-20页
            4.2 5'RACE技术应注意事项第20-21页
        5 新型RACE技术第21-23页
            5.1 Marathon PCR技术SMART-RACE技术第21页
            5.2 "电子"cDNA文库筛选第21-23页
    第三章 植物功能基因组学中基因表达的研究第23-31页
        1 基因表达模式的研究第23页
        2 植物功能基因组学中基因表达的研究第23-29页
        3 蛋白质水平上的基因表达研究第29-31页
    第四章 囊泡膜相关蛋白和水通道蛋白的研究第31-43页
        1 SNAREs蛋白家族的研究第31-33页
        2 植物SNAREs的生物学功能第33-36页
            2.1 促进植物的胞质分裂第33页
            2.2 与植物的抗病性有关第33-34页
            2.3 SNAREs参与ABA信号传导及生长素的极性运输第34页
            2.4 SNAREs参与植物对非生物胁迫的响应第34-35页
            2.5 SNAREs与脂质筏的重要联系第35页
            2.6 SNAREs在植物向重力性中的作用第35-36页
        3 水通道蛋白基因(Aquaporins)的研究第36-43页
    本研究的目的和意义第43-45页
第二部分 研究报告第45-109页
    第五章 囊泡膜相关蛋白基因(GhVAMP)的克隆及表达分析第45-65页
        1 材料与方法第45-46页
            1.1 植物材料第45页
            1.2 菌株和试剂第45-46页
            1.3 培养基第46页
            1.4 实验引物第46页
        2 实验方法第46-54页
            2.1 棉花总RNA的提取及DNaseI消化第46-49页
            2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第49-51页
            2.3 GhVAMP cDNA全长序列的获得及表达分析第51-54页
        3 结果与分析第54-62页
            3.1 总RNA完整性分析第54-55页
            3.2 RACE方法获得GhVAMP基因全长第55页
            3.3 GhVAMP全长序列的获得与分析第55-59页
            3.4 GhVAMP的基因组序列分析第59-61页
            3.5 GhVAMP基因的表达分析第61-62页
        4 讨论第62-65页
    第六章 水通道蛋白基因(GhAQP)的表达分析与亚细胞定位第65-77页
        1 材料与方法第65-66页
            1.1 植物材料第65-66页
            1.2 菌株和试剂第66页
            1.3 培养基第66页
            1.4 实验引物第66页
        2 实验方法第66-68页
            2.1 GhAQP基因的亚细胞定位第66-67页
            2.2 基因枪介导的瞬时表达载体转化植物细胞第67-68页
        3 结果与分析第68-75页
            3.1 GhAQP的基因组序列分析第68-70页
            3.2 GhAQP基因的表达分析第70-72页
            3.3 GhAQP基因的亚细胞定位第72-75页
        4 讨论第75-77页
            4.1 GhAQP基因在棉花中的表达第75-76页
            4.2 GhAQP基因在洋葱表皮细胞亚细胞定位分析第76-77页
    第七章 农杆菌介导GhAQP和GhVAMP基因的遗传转化与功能的初步鉴定第77-109页
        1 材料与方法第77-93页
            1.1 植物材料第77页
            1.2 质粒和菌株第77-79页
            1.3 培养基第79-81页
            1.4 试剂第81页
            1.5 植物表达载体的农杆菌转化第81-83页
            1.6 农杆菌介导的植物遗传转化第83-84页
            1.7 转基因再生植株的PCR检测第84-87页
            1.8 愈伤组织的GUS检测第87-88页
            1.9 再生植株叶片的卡那霉素抗性检测第88页
            1.10 Southern杂交第88-91页
            1.11 水通道蛋白基因在转基因棉花中的功能验证第91-93页
        2 结果与分析第93-105页
            2.1 植物表达载体的农杆菌转化第93-94页
            2.2 GhAQP与GhVAMP基因的棉花遗传转化及转基因植株的获得第94-96页
            2.3 愈伤组织的GUS检测第96-97页
            2.4 转基因棉花的分子检测及卡那抗性检测第97-99页
            2.5 Southern杂交第99-101页
            2.6 T_0转基因植株的变化第101-102页
            2.7 转GhAQP基因棉花的低渗实验第102-105页
        3 讨论第105-109页
            3.1 农杆菌介导的棉花遗传转化及再生植株的检测第105-106页
            3.2 转GhAQP基因的低渗实验第106-109页
全文结论第109-111页
参考文献第111-123页
致谢第123页

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