| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 引言 | 第11-16页 |
| 技术路线图 | 第16-17页 |
| 1. 材料和方法 | 第17-53页 |
| 1.1 材料 | 第17-23页 |
| 1.1.1 主要药品和试剂 | 第17-20页 |
| 1.1.2 主要酶类 | 第20页 |
| 1.1.3 主要质粒、细菌、细胞、实验动物 | 第20-21页 |
| 1.1.4 主要实验仪器 | 第21-23页 |
| 1.2 方法 | 第23-53页 |
| 1.2.1 重组质粒pAAV2.1-MHC-TnT-HIF1a的构建路线图 | 第23页 |
| 1.2.2 试剂的配制 | 第23-26页 |
| 1.2.3 DH-5a电转化菌的制备 | 第26-27页 |
| 1.2.4 质粒DNA的转化 | 第27页 |
| 1.2.5 碱裂解法小量提取质粒DNA | 第27-28页 |
| 1.2.6 重组pAAV-MHC-TnT-GFP质粒的构建 | 第28-33页 |
| 1.2.7 重组pAAV-MHC-TnT-HIF1a质粒的构建 | 第33-36页 |
| 1.2.8 质粒pEMBL-D(+)-CMV-GFP、pAAV9、pAAV8、pAAV6、pAAV2和pHelper的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 1.2.9 超速离心法大量提取质粒DNA | 第37-39页 |
| 1.2.10 293细胞的培养 | 第39-40页 |
| 1.2.11 原代心肌细胞的培养 | 第40-41页 |
| 1.2.12 质粒pAAV-MHC-TnT-GFP、pEMBL-D(+)-CMV-GFP、pAAV-MHC-TnT-HIF1a转染293细胞 | 第41-42页 |
| 1.2.13 6型和8型重组腺相关病毒的包装 | 第42-43页 |
| 1.2.14 病毒的收获与纯化 | 第43-44页 |
| 1.2.15 SDS-PAGE法分析rAAV6-MHC-TnT-HIF1a、rAAV8-MHC-TnT-HIF1a的纯度 | 第44-45页 |
| 1.2.16 病毒滴度的测定 | 第45-50页 |
| 1.2.17 rAAV6-MHC-TnT-HIF1a、rAAV8-MHC-TnT-HIF1a转导体外培养细胞、Western Blot检测HIF-1a的检测表达 | 第50-53页 |
| 2、结果 | 第53-71页 |
| 2.1 PCR产物GFP及质粒pAAV-MHC-TnT-Lacznls的酶切 | 第53页 |
| 2.2 重组pAAV-MHC-TnT-GFP质粒酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3 重组pAAV-MHC-TnT-GFP质粒测序结果 | 第54-58页 |
| 2.4 质粒pAAV-MHC-TnT-GFP及pGEM-HIF1a酶切 | 第58-59页 |
| 2.5 重组pAAV-MHC-TnT-HIF1a质粒酶切鉴定 | 第59-60页 |
| 2.6 重组pAAV-MHC-TnT-HIF1a质粒测序结果 | 第60-65页 |
| 2.7 大提质粒pEMBL-D(+)-CMV-GFP、AAV9、pXX8、XX6、AAV2和pHelper的电泳 | 第65页 |
| 2.8 质粒pEMBL-D(+)-CMV-GFP、pAAV9、pAAV8、pAAV6、pAAV2和pHelper酶切鉴定 | 第65-67页 |
| 2.9 心肌细胞的分离培养结果 | 第67页 |
| 2.10 荧光显微镜检测pAAV-MHC-TnT-GFP的GFP表达 | 第67-68页 |
| 2.11 SDS-PAGE分析rAAV6-MHC-TnT-HIF1a、rAAV8-MHC-TnT-HIF1a的纯度 | 第68-69页 |
| 2.12 rAAV病毒滴度测定 | 第69-70页 |
| 2.13 rAAV6/rAAV8病毒的电镜分析 | 第70页 |
| 2.14 Western Blot检测HIF-1a的表达 | 第70-71页 |
| 3、讨论 | 第71-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 综述 | 第85-97页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 主要缩写词表 | 第97-99页 |
| 在读期间发表的主要学术论文及参与课题 | 第99-101页 |
| 附图 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
