| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 RNA编辑的研究进展 | 第9-19页 |
| 1 RNA编辑的类型 | 第9-11页 |
| 1.1 锥体虫线粒体基因U的插入和去除 | 第9-10页 |
| 1.2 高等生物的A至I RNA编辑 | 第10-11页 |
| 1.3 高等生物的C至U RNA编辑 | 第11页 |
| 2 RNA编辑的研究方法 | 第11-12页 |
| 3 载脂蛋白B概述 | 第12-13页 |
| 4 APOB的RNA编辑 | 第13-19页 |
| 4.1 APOB RNA编辑位点序列特征 | 第14页 |
| 4.2 APOB RNA编辑酶组份 | 第14-16页 |
| 4.3 APOB RNA编辑的调节 | 第16-17页 |
| 4.4 APOB RNA编辑与基因治疗 | 第17-18页 |
| 4.5 APOB RNA编辑的研究技术 | 第18-19页 |
| 第二章 APOB RNA编辑的细胞异质性研究 | 第19-49页 |
| 1 实验材料与设备 | 第19-22页 |
| 1.1 引物设计与合成 | 第19-20页 |
| 1.2 材料及试剂 | 第20-22页 |
| 1.3 主要设备 | 第22页 |
| 2 重组质粒的构建及鉴定 | 第22-31页 |
| 2.1 APOB表达载体的构建策略 | 第22-24页 |
| 2.2 质粒提取 | 第24页 |
| 2.3 目的片段合成及酶切 | 第24-26页 |
| 2.3.1 编辑位点序列的化学合成 | 第24-25页 |
| 2.3.2 GFP基因的PCR合成 | 第25-26页 |
| 2.3.3 GFP基因以及载体的酶切 | 第26页 |
| 2.4 目的基因及载体片段的割胶纯化 | 第26-27页 |
| 2.5 目的基因和载体片段的连接 | 第27页 |
| 2.6 感受态大肠杆菌DH5a的制备 | 第27-28页 |
| 2.7 连接物的转化 | 第28页 |
| 2.8 重组质粒的提取及鉴定 | 第28-29页 |
| 2.8.1 pDsRed2-HB的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.8.2 pDsRed2-CAA-GFP的酶切鉴定 | 第29页 |
| 2.8.3 pDsRed2-AAA-GFP及pDsRed2-TAA-GFP构建与鉴定 | 第29页 |
| 2.9 去内毒素质粒抽提 | 第29-31页 |
| 3 细胞的转染 | 第31-34页 |
| 3.1 细胞的培养与传代 | 第31页 |
| 3.2 细胞的转染 | 第31-32页 |
| 3.2.1 Cos-7细胞的转染 | 第31-32页 |
| 3.2.2 Caco-2细胞的转染 | 第32页 |
| 3.3 转染细胞的LSCM观察 | 第32-33页 |
| 3.4 转染细胞的流式细胞仪分选 | 第33页 |
| 3.5 细胞周期阻断 | 第33-34页 |
| 3.5.1 秋水仙素阻断细胞 | 第33页 |
| 3.5.2 PI染色方法 | 第33-34页 |
| 3.5.3 流式细胞仪检测细胞周期分布 | 第34页 |
| 4 APOB RNA编辑的细胞周期研究 | 第34-36页 |
| 4.1 周期细胞的转染 | 第34-35页 |
| 4.1.1 Caco-2细胞的转染 | 第35页 |
| 4.1.2 CBRH-7919细胞的转染 | 第35页 |
| 4.2 周期细胞转染的LSCM观察 | 第35页 |
| 4.3 周期细胞转染的FCM检测 | 第35-36页 |
| 5 结果 | 第36-45页 |
| 5.1 重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| 5.2 APOB RNA编辑的检测 | 第38-39页 |
| 5.2.1 APOB RNA编辑的LSCM观察 | 第38-39页 |
| 5.2.2 FCM分选后的LSCM观察 | 第39页 |
| 5.3 细胞周期对编辑的影响 | 第39-45页 |
| 5.3.1 细胞周期捕获的FCM检测 | 第39-41页 |
| 5.3.2 APOB RNA编辑表达载体转染周期细胞的LSCM观察 | 第41-43页 |
| 5.3.3 APOB RNA编辑表达载体转染周期细胞的FCM检测 | 第43-45页 |
| 6 讨论 | 第45-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 缩略语 | 第56-57页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
