| 英文缩略词 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 肝癌干细胞的鉴定 | 第16-33页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 材料与方法 | 第18-23页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| 1.1 细胞 | 第18页 |
| 1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第19页 |
| 1.4 计算机分析软件 | 第19-20页 |
| 1.5 主要试剂及其配方 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-23页 |
| 2.1 肝癌细胞的培养 | 第20-21页 |
| 2.2 肝癌干细胞相关亚群的无血清悬浮培养(sphere培养) | 第21页 |
| 2.3 PKH26染色 | 第21页 |
| 2.4 流式细胞术分析 | 第21-22页 |
| 2.5 自我更新能力检测 | 第22-23页 |
| 实验结果 | 第23-28页 |
| 1 人肝癌细胞系Be17402-V13中肝癌干细胞的鉴定 | 第23-25页 |
| 1.1 肝癌干细胞的自我更新能力的检测 | 第23页 |
| 1.2 PKH26染色检测肝癌干细胞 | 第23-24页 |
| 1.3 流式细胞术检测sphere细胞中肝癌干细胞的相关标志物 | 第24-25页 |
| 2 人肝癌细胞系MHCC97-L肿瘤干细胞的鉴定 | 第25-28页 |
| 2.1 sphere培养及PKH26染色检测肝癌干细胞 | 第25-26页 |
| 2.2 流式细胞术检测sphere细胞中肝癌干细胞的相关标志物 | 第26-28页 |
| 讨论 | 第28-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二章 抗人肝癌干细胞单抗的筛选与鉴定 | 第33-79页 |
| 前言 | 第33-35页 |
| 材料与方法 | 第35-53页 |
| 1 材料 | 第35-40页 |
| 1.1 细胞 | 第35页 |
| 1.2 动物 | 第35页 |
| 1.3 主要试剂 | 第35-38页 |
| 1.4 主要仪器与设备 | 第38-39页 |
| 1.5 计算机分析软件 | 第39页 |
| 1.6 主要试剂及其配方 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-53页 |
| 2.1 肝癌细胞的培养 | 第40-41页 |
| 2.2 肝癌干细胞相关亚群的无血清悬浮培养(sphere培养) | 第41页 |
| 2.3 杂交瘤细胞的培养 | 第41-42页 |
| 2.4 无血清杂交瘤上清的收集 | 第42页 |
| 2.5 ELISA酶联免疫吸附试验 | 第42-44页 |
| 2.6 流式细胞荧光 | 第44-45页 |
| 2.7 细胞免疫荧光 | 第45-46页 |
| 2.8 肝癌干细胞体外生物学特征的分析 | 第46-48页 |
| 2.9 肝癌干细胞体内致瘤能力的分析 | 第48页 |
| 2.10 抗肝癌干细胞单抗对肝癌干细胞生物学功能影响的分析 | 第48-50页 |
| 2.11 抗体动物治疗实验 | 第50-51页 |
| 2.12 亲和纯化IgG抗体 | 第51页 |
| 2.13 SDS-PAGE凝胶电泳和纯度鉴定 | 第51-52页 |
| 2.14 统计学分析 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-72页 |
| 1 抗人肝癌干细胞单抗的筛选 | 第53-54页 |
| 1.1 抗人肝癌干细胞单抗的制备与初筛 | 第53页 |
| 1.2 抗人肝癌干细胞单抗的类和亚类及产量的测定 | 第53-54页 |
| 1.3 抗人肝癌干细胞单抗抗体的纯度鉴定 | 第54页 |
| 2 抗人肝癌干细胞单抗21A3的研究 | 第54-66页 |
| 2.1 抗人肝癌干细胞单抗21A3在Be17402-V13细胞中的研究 | 第54-66页 |
| 2.1.1 流式细胞术检测21A3~+细胞在Be17402-V13 sphere细胞中的富集 | 第54-55页 |
| 2.1.2 双色细胞免疫荧光检测单抗21A3识别抗原与ESA~+肝癌干细胞的共表达 | 第55-56页 |
| 2.1.3 双色流式细胞术检测单抗21A3与肝癌干细胞标志物ESA的共染 | 第56-57页 |
| 2.1.4 21A3~+细胞的自我更新能力检测 | 第57页 |
| 2.1.5 21A3~+细胞体外侵袭能力的分析 | 第57-59页 |
| 2.1.6 21A3~+细胞耐药能力的分析 | 第59-60页 |
| 2.1.7 21A3~+细胞体内致瘤能力的分析 | 第60-61页 |
| 2.1.8 单抗21A3抑制肝癌细胞自我更新能力的分析 | 第61-62页 |
| 2.1.9 单抗21A3抑制肝癌细胞侵袭能力的分析 | 第62-63页 |
| 2.1.10 单抗21A3降低肝癌干细胞耐药能力的分析 | 第63-64页 |
| 2.1.11 单抗21A3靶向肝癌干细胞治疗肝癌的体内实验研究 | 第64-66页 |
| 2.2 抗人肝癌干细胞单抗21A3在MHCC97-L细胞中的研究 | 第66-72页 |
| 2.2.1 流式细胞术检测21A3~+细胞在MHCC97-L sphere细胞中的富集 | 第66-67页 |
| 2.2.2 双色细胞免疫荧光检测单抗21A3识别抗原与CD90~+肝癌干细胞的共表达 | 第67-68页 |
| 2.2.3 双色流式细胞术检测单抗21A3与肝癌干细胞标志物CD90共染 | 第68页 |
| 2.2.4 单抗21A3抑制肝癌细胞自我更新能力的分析 | 第68-69页 |
| 2.2.5 单抗21A3抑制肝癌细胞侵袭能力的分析 | 第69-70页 |
| 2.2.6 单抗21A3降低肝癌干细胞耐药能力的分析 | 第70-72页 |
| 讨论 | 第72-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 全文小结 | 第79-81页 |
| 综述 | 第81-100页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第101页 |
