| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩略词 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-40页 |
| 1.1 p53蛋白研究概况 | 第20-26页 |
| 1.1.1 p53蛋白的发现 | 第20-21页 |
| 1.1.2 野生型p53的结构与基本功能 | 第21-23页 |
| 1.1.3 突变型p53的研究现状 | 第23-26页 |
| 1.1.3.1 p53突变的类型和常见形式 | 第23-25页 |
| 1.1.3.2 突变p53的功能缺失(Loss of Function)、负显性抑制(Dominant-negative)和功能获得(Gain of Function) | 第25-26页 |
| 1.2 突变p53功能获得的研究进程 | 第26-33页 |
| 1.2.1 突变p53功能获得的研究历史 | 第26页 |
| 1.2.2 突变p53获得癌基因活性的机制研究新进展 | 第26-28页 |
| 1.2.3 突变p53获得癌基因活性的生物学现象 | 第28-33页 |
| 1.2.3.1 突变p53导致细胞基因组不稳定性 | 第28-30页 |
| 1.2.3.2 突变p53促使肿瘤细胞获得抗凋亡能力 | 第30页 |
| 1.2.3.3 突变p53促使肿瘤细胞获得转移与侵袭能力 | 第30-32页 |
| 1.2.3.4 突变p53获得癌基因活性后的其他生物学效应 | 第32-33页 |
| 1.3 抑癌基因p53与原癌基因Ras在肿瘤转化中的相互作用 | 第33-35页 |
| 1.3.1 原癌基因Ras与肿瘤转化 | 第33-34页 |
| 1.3.2 p53突变与Ras协同作用促使肿瘤转化 | 第34-35页 |
| 1.4 突变p53获得性耐药的研究现状 | 第35-37页 |
| 1.5 本研究的主要内容及研究意义 | 第37-40页 |
| 第二章 p53~(N236S)细胞耐受阿霉素诱导的细胞凋亡 | 第40-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-43页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第40页 |
| 2.1.2 实验细胞系 | 第40页 |
| 2.1.3 实验试剂的配制 | 第40-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-53页 |
| 2.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第44-47页 |
| 2.2.2.1 细胞复苏 | 第44-45页 |
| 2.2.2.2 细胞传代 | 第45-46页 |
| 2.2.2.3 细胞冻存 | 第46-47页 |
| 2.2.3 细胞收集 | 第47页 |
| 2.2.4 H-ras~(G12V)载体转染 | 第47-48页 |
| 2.2.5 药物阿霉素处理MEF细胞 | 第48-49页 |
| 2.2.6 Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡 | 第49-51页 |
| 2.2.7 MTT比色法 | 第51-52页 |
| 2.2.8 SRB比色法 | 第52-53页 |
| 2.3 实验仪器 | 第53-54页 |
| 2.4 实验结果及分析 | 第54-59页 |
| 2.4.1 p53~(N236S)细胞对化疗药物阿霉素处理具有耐药性 | 第54-57页 |
| 2.4.2 p53~(N236S)细胞抵抗抗肿瘤药物阿霉素诱导的凋亡 | 第57-58页 |
| 2.4.3 Ras协同p53~(N236S)促进细胞耐受阿霉素诱导的凋亡 | 第58-59页 |
| 2.5 讨论 | 第59-62页 |
| 第三章 p53~(N236S)细胞通过抑制凋亡通路同时增强细胞损伤修复能力的方式对化疗药物阿霉素的处理具有耐药性 | 第62-87页 |
| 3.1 实验材料 | 第62-66页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第62页 |
| 3.1.2 实验细胞系 | 第62-63页 |
| 3.1.3 实验试剂的配制 | 第63-66页 |
| 3.2 实验方法 | 第66-75页 |
| 3.2.1 Western Blot检测方法 | 第66-71页 |
| 3.2.1.1 细胞总蛋白的提取和定量 | 第66-67页 |
| 3.2.1.2 聚丙烯酰氨凝胶的制备 | 第67-69页 |
| 3.2.1.3 SDS-PAGE电泳蛋白样品的制备 | 第69-70页 |
| 3.2.1.4 SDS-PAGE电泳 | 第70页 |
| 3.2.1.5 转膜 | 第70页 |
| 3.2.1.6 封闭和免疫杂交 | 第70-71页 |
| 3.2.1.7 显色 | 第71页 |
| 3.2.2 免疫荧光染色 | 第71-73页 |
| 3.2.3 脉冲场凝胶电泳实验 | 第73-74页 |
| 3.2.4 细胞周期检测 | 第74-75页 |
| 3.3 实验仪器 | 第75-76页 |
| 3.4 实验结果及分析 | 第76-85页 |
| 3.4.1 p53S细胞主要通过功能缺失的方式实现对阿霉素诱导的凋亡耐受 | 第76-78页 |
| 3.4.2 在阿霉素诱导的凋亡刺激下,p53缺失和携带p53~(N236S)突变的细胞的凋亡表型存在差异性 | 第78-80页 |
| 3.4.3 在阿霉素诱导的DNA损伤刺激下,p53缺失和携带p53~(N236S)突变的细胞的DNA损伤程度存在差异性 | 第80-85页 |
| 3.5 讨论 | 第85-87页 |
| 第四章 p53~(N236S)获得性耐药抗凋亡机制的研究 | 第87-107页 |
| 4.1 实验材料 | 第87-90页 |
| 4.1.1 实验细胞系 | 第87页 |
| 4.1.2 实验试剂配制 | 第87-90页 |
| 4.2 实验方法 | 第90-97页 |
| 4.2.1 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第90-93页 |
| 4.2.2 实时荧光定量PCR(Realtime PCR) | 第93-95页 |
| 4.2.3 siRNA干扰实验 | 第95-96页 |
| 4.2.4 Western Blot | 第96-97页 |
| 4.2.5 流式细胞术检测凋亡 | 第97页 |
| 4.3 实验材料 | 第97-98页 |
| 4.4 实验结果及分析 | 第98-105页 |
| 4.4.1 p53S通过干扰线粒体凋亡途径抵抗阿霉素诱导的凋亡 | 第98-102页 |
| 4.4.2 降低survivin的表达能够增加p53S相关细胞对阿霉素的敏感性 | 第102-105页 |
| 4.5 讨论 | 第105-107页 |
| 第五章 总结与展望 | 第107-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-123页 |
| 附录A 硕士期间论文发表情况 | 第123页 |
