| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 第一章 材料与方法 | 第14-25页 |
| 1 材料、试剂和仪器 | 第14-19页 |
| 1.1 菌种 | 第14-15页 |
| 1.2 质粒 | 第15-16页 |
| 1.3 PCR引物 | 第16-17页 |
| 1.4 培养基 | 第17页 |
| 1.5 试剂 | 第17-19页 |
| 1.6 仪器和设备 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.1 菌种的分离纯化 | 第19-20页 |
| 2.2 FK506发酵和液相分析 | 第20页 |
| 2.3 菌种保藏 | 第20页 |
| 2.4 抗生素敏感性实验 | 第20页 |
| 2.5 链霉菌基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.6 PCR反应体系和程序 | 第21页 |
| 2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
| 2.8 DNA片段的胶回收和PCR纯化 | 第22页 |
| 2.9 大肠杆菌质粒的提取 | 第22页 |
| 2.10 DNA酶切、去磷酸化和酶连 | 第22-23页 |
| 2.11 大肠杆菌质粒转化 | 第23页 |
| 2.12 大肠杆菌-链霉菌属间接合转移 | 第23-24页 |
| 2.13 敲除菌株的筛选 | 第24页 |
| 2.14 PCR验证 | 第24-25页 |
| 第二章 转录调控因子编码基因对FK506合成的影响研究 | 第25-33页 |
| 1 基因改造 | 第25-30页 |
| 1.1 PCR引物设计 | 第25-26页 |
| 1.2 PCR扩增 | 第26页 |
| 1.3 质粒构建 | 第26-28页 |
| 1.4 工程菌构建 | 第28-30页 |
| 2 发酵与液相分析 | 第30-31页 |
| 2.1 fkbN改造菌株的发酵和液相分析 | 第30页 |
| 2.2 tcs7改造菌株的发酵和液相分析 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 初级代谢基因对FK506合成的影响研究 | 第33-40页 |
| 1 基因改造 | 第33-37页 |
| 1.1 PCR引物设计 | 第33页 |
| 1.2 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 1.3 质粒构建 | 第34-36页 |
| 1.4 工程菌构建 | 第36-37页 |
| 2 发酵与液相分析 | 第37-38页 |
| 2.1 zwf2、6ccA2基因增加拷贝数工程菌株的发酵和液相分析 | 第37-38页 |
| 2.2 gltD改造菌株的发酵和液相分析 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 FK506生物合成基因的功能研究 | 第40-45页 |
| 1 基因改造 | 第40-42页 |
| 1.1 PCR引物设计 | 第40页 |
| 1.2 PCR扩增 | 第40-41页 |
| 1.3 质粒构建 | 第41-42页 |
| 1.4 工程菌构建 | 第42页 |
| 2 发酵与液相分析 | 第42-43页 |
| 2.1 fkbM基因增加拷贝数工程菌株的发酵和液相分析 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 外源颤血红蛋白基因对他克莫司产生菌生长影响 | 第45-49页 |
| 1 基因改造 | 第45-47页 |
| 1.1 质粒构建 | 第45-46页 |
| 1.2 工程菌构建 | 第46-47页 |
| 2 发酵分析 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 结论 | 第49-52页 |
| 1 转录调控因子编码基因对FK506合成的影响研究 | 第49页 |
| 2 初级代谢基因对FK506合成的影响研究 | 第49-50页 |
| 3 FK506生物合成基因的功能研究 | 第50页 |
| 4 外源颤血红蛋白基因对他克莫司产生菌生长影响 | 第50页 |
| 5 讨论与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 文献综述 | 第55-65页 |
| 1 他克莫司产生菌 | 第55-56页 |
| 2 他克莫司生物合成机制 | 第56-60页 |
| 2.1 骨架的合成 | 第57页 |
| 2.2 特殊前体的合成 | 第57-59页 |
| 2.3 结构后修饰 | 第59-60页 |
| 3 他克莫司发酵营养学与菌种改造 | 第60-61页 |
| 3.1 合成前体物对发酵水平的影响 | 第60-61页 |
| 3.2 遗传改造 | 第61页 |
| 4 发酵产物纯化 | 第61-62页 |
| 5 总结和展望 | 第62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
