| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 0 前言 | 第12-24页 |
| 1 荧光定量PCR检测哈维氏弧菌基因表达方法的建立 | 第24-38页 |
| ·材料与方法 | 第24-30页 |
| ·实验菌株 | 第24页 |
| ·培养基与人工海水的配制 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·引物设计与合成 | 第25-26页 |
| ·哈维氏弧菌的基因克隆 | 第26-28页 |
| ·哈维氏弧菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·基因的PCR扩增及纯化 | 第26-27页 |
| ·PCR产物克隆质粒的构建 | 第27页 |
| ·质粒的转化与鉴定 | 第27-28页 |
| ·双标准曲线的制作 | 第28页 |
| ·相对标准品构建 | 第28页 |
| ·荧光定量PCR方法制作标准曲线 | 第28页 |
| ·哈维氏弧菌待测样品的制备 | 第28-30页 |
| ·哈维氏弧菌总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·哈维氏弧菌总RNA的纯化 | 第29-30页 |
| ·cDNA的合成 | 第30页 |
| ·荧光定量PCR反应及数据处理 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-36页 |
| ·哈维氏弧菌的引物序列 | 第30-31页 |
| ·荧光定量PCR产物的特异性 | 第31-32页 |
| ·哈维氏弧菌的基因克隆结果鉴定 | 第32-33页 |
| ·标准曲线及相关系数 | 第33-35页 |
| ·哈维氏弧菌总RNA的提取与纯化结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 2 环境应激对哈维氏弧菌基因表达的影响 | 第38-47页 |
| ·材料与方法 | 第38-39页 |
| ·实验菌株 | 第38页 |
| ·热激处理 | 第38页 |
| ·冷激处理 | 第38-39页 |
| ·荧光定量PCR检测及数据处理 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-45页 |
| ·热激处理对哈维氏弧菌基因表达的影响 | 第39-42页 |
| ·热激处理对rpos基因表达的影响 | 第39页 |
| ·热激处理对hsp基因表达的影响 | 第39-40页 |
| ·热激处理对MnSOD基因表达的影响 | 第40页 |
| ·热激处理对oppA基因表达的影响 | 第40-41页 |
| ·热激处理对vhh基因表达的影响 | 第41页 |
| ·热激处理对cysS基因表达的影响 | 第41-42页 |
| ·冷激处理对哈维氏弧菌基因表达的影响 | 第42-45页 |
| ·冷激处理对rpos基因表达的影响 | 第42页 |
| ·冷激处理对hsp基因表达的影响 | 第42-43页 |
| ·冷激处理对MnSOD基因表达的影响 | 第43页 |
| ·冷激处理对oppA基因表达的影响 | 第43-44页 |
| ·冷激处理对vhh基因表达的影响 | 第44页 |
| ·冷激处理对cysS基因表达的影响 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 3 哈维氏弧菌进入VBNC过程及复苏后基因表达动态变化 | 第47-56页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·实验菌体 | 第47页 |
| ·实验水体及培养容器 | 第47页 |
| ·哈维氏弧菌VBNC状态的诱导及复苏 | 第47-48页 |
| ·荧光定量PCR待测样品的制备 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR反应及数据处理 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-53页 |
| ·哈维氏弧菌SF-1在低温寡营养状态下的存活曲线 | 第48-49页 |
| ·低温诱导VBNC及其复苏后哈维氏弧菌的基因表达 | 第49-53页 |
| ·rpoS基因的表达 | 第49-50页 |
| ·hsp基因的表达 | 第50页 |
| ·MnSOD基因的表达 | 第50-51页 |
| ·oppA基因的表达 | 第51-52页 |
| ·vhh基因的表达 | 第52页 |
| ·cysS基因的表达 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| 4 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
| 发表的学术论文 | 第70页 |