| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstracts | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-35页 |
| 1.1 根结线虫概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 根结线虫的分类地位和形态 | 第12页 |
| 1.1.2 根结线虫的分布及危害症状 | 第12页 |
| 1.1.3 根结线虫的生活史 | 第12-13页 |
| 1.2 根结线虫的防治 | 第13-22页 |
| 1.2.1 化学防治 | 第14-16页 |
| 1.2.2 农业防治 | 第16-17页 |
| 1.2.3 抗线虫育种 | 第17-20页 |
| 1.2.4 生物防治 | 第20-22页 |
| 1.3 P.chlamydosporia概述 | 第22-34页 |
| 1.3.1 P.chlamydosporia的分类地位和变种 | 第22页 |
| 1.3.2 P.chlamydosporia的形态学 | 第22-24页 |
| 1.3.3 P.chlamydoporia的培养条件及影响因素 | 第24-26页 |
| 1.3.4 国内外应用P.chlamydoporia防治线虫研究进展 | 第26-30页 |
| 1.3.5 P. chlamydoporia生防机理研究进展 | 第30-34页 |
| 1.4 本研究的目的意义、背景及技术路线 | 第34-35页 |
| 1.4.1 研究目的意义和背景 | 第34页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第34-35页 |
| 第二章 P.chlamydosporia PC-170生防效果测定及根定殖观察 | 第35-56页 |
| 2.1 材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 供试材料和载体 | 第35页 |
| 2.1.2 供试试剂 | 第35页 |
| 2.1.3 引物 | 第35-36页 |
| 2.1.4 常用缓冲液及培养基的配制(见附录C) | 第36页 |
| 2.2 方法 | 第36-46页 |
| 2.2.1 分子生物学操作常规技术 | 第36-42页 |
| 2.2.2 P.chlamydosporia PC-170变种验证 | 第42页 |
| 2.2.3 pKOV21-GFP载体构建策略 | 第42页 |
| 2.2.4 M.incognita相关操作技术 | 第42-45页 |
| 2.2.5 P.chlamydosporia PC-170防治M incognita大田实验 | 第45-46页 |
| 2.3 结果与分析 | 第46-54页 |
| 2.3.1 pKOV21-GFP载体构建 | 第46-47页 |
| 2.3.2 pKOV21-GFP测序结果 | 第47页 |
| 2.3.3 P.chlamydosporia PC-170变种的确认 | 第47-48页 |
| 2.3.4 PC-170gfp菌株的获得 | 第48-50页 |
| 2.3.5 P.chlamydosporia PC-170卵寄生率的测定 | 第50页 |
| 2.3.6 P.chlamydosporia PC-170防治M incognita盆栽实验 | 第50-51页 |
| 2.3.7 P.chlamydosporia PC-170黄瓜根部定殖实验 | 第51页 |
| 2.3.8 根结及M incognita卵块中P.chlamydosporia的分离 | 第51-53页 |
| 2.3.9 P.chlamydosporia PC-170防治M incognita大田实验 | 第53-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 P.chlamydosporia PC-170基因组及转录组分析 | 第56-72页 |
| 3.1 材料 | 第56-57页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第56页 |
| 3.1.2 供试试剂 | 第56页 |
| 3.1.3 引物 | 第56-57页 |
| 3.1.4 常用缓冲液及培养基的配制(见附录C) | 第57页 |
| 3.2 方法 | 第57-61页 |
| 3.2.1 P.chlamydosporia PC-170基因组样品的制备 | 第57页 |
| 3.2.2 P.chlamydosporia PC-170转录组样品的制备 | 第57-58页 |
| 3.2.3 基因组的组装、基因集预测及功能注释 | 第58-59页 |
| 3.2.4 候选敲除基因的获得 | 第59-60页 |
| 3.2.5 转录组数据分析 | 第60-61页 |
| 3.3 结果与分析 | 第61-70页 |
| 3.3.1 P.chalmydosporia PC-170基因组样品的制备 | 第61页 |
| 3.3.2 P.chalmydosporia PC-170转录组样品的制备 | 第61页 |
| 3.3.3 P.chalmydosporia PC-170基因组数据分析 | 第61-63页 |
| 3.3.4 候选敲除基因的获得 | 第63-65页 |
| 3.3.5 转录组数据分析 | 第65-70页 |
| 3.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 P.chlamydosporia基因敲除体系的建立 | 第72-89页 |
| 4.1 材料 | 第72-74页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第72页 |
| 4.1.2 供试试剂 | 第72页 |
| 4.1.3 引物 | 第72-74页 |
| 4.1.4 常用缓冲液及培养基的配制(见附录C) | 第74页 |
| 4.1.5 抗生素配制方法及使用浓度(见附录D) | 第74页 |
| 4.2 方法 | 第74-80页 |
| 4.2.1 分子生物学操作常规技术 | 第74-77页 |
| 4.2.2 融合PCR及同源基因敲除策略 | 第77-78页 |
| 4.2.3 PC-170对不同抑制剂的抗性浓度测定 | 第78-79页 |
| 4.2.4 同源敲除突变体的PCR鉴定 | 第79页 |
| 4.2.5 突变体单孢分离,遗传稳定性及Southern杂交分析 | 第79-80页 |
| 4.2.6 突变体与野生型生长速度测定 | 第80页 |
| 4.2.7 突变体与野生型卵寄生率测定 | 第80页 |
| 4.3 结果与分析 | 第80-87页 |
| 4.3.1 基于融合PCR的Split-marker的构建 | 第80-81页 |
| 4.3.2 最适筛选抗生素的筛选 | 第81-82页 |
| 4.3.3 PEG介导的原生质体转化 | 第82-83页 |
| 4.3.4 突变体的筛选 | 第83-86页 |
| 4.3.5 突变体与野生型生长速度测定 | 第86页 |
| 4.3.6 突变体与野生型卵寄生率测定 | 第86-87页 |
| 4.4 讨论 | 第87-89页 |
| 第五章 丝氨酸蛋白酶基因家族的功能探究 | 第89-103页 |
| 5.1 材料 | 第89-92页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第89页 |
| 5.1.2 供试试剂 | 第89页 |
| 5.1.3 引物 | 第89-92页 |
| 5.1.4 常用缓冲液及培养基的配制(见附录C) | 第92页 |
| 5.2 方法 | 第92-94页 |
| 5.2.1 分子生物学操作常规技术 | 第92页 |
| 5.2.2 融合PCR及同源基因敲除策略(见P66) | 第92页 |
| 5.2.3 同源敲除突变体的PCR鉴定(见P68) | 第92页 |
| 5.2.4 突变体单孢分离,遗传稳定性及Southern杂交分析(见P68) | 第92页 |
| 5.2.5 突变体与野生型生长速度测定(见P69) | 第92页 |
| 5.2.6 突变体与野生型卵寄生率测定(见P32) | 第92页 |
| 5.2.7 丝氨酸蛋白酶基因家族的获得 | 第92-93页 |
| 5.2.8 P.chlamydosporia PC-170蛋白酶分析 | 第93-94页 |
| 5.3 结果与分析 | 第94-100页 |
| 5.3.1 丝氨酸蛋白酶基因家族的获得 | 第94页 |
| 5.3.2 突变体的筛选 | 第94-95页 |
| 5.3.3 突变体与野生型生长速度测定 | 第95页 |
| 5.3.4 突变体与野生型卵寄生率测定 | 第95-96页 |
| 5.3.5 P.chlamydospora PC-170蛋白酶分析 | 第96-100页 |
| 5.4 讨论 | 第100-103页 |
| 第六章 结论和创新点 | 第103-105页 |
| 6.1 结论 | 第103-104页 |
| 6.2 创新点 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 附录A 本论文所用重要缩写词及中文对照 | 第119-122页 |
| 附录B 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第122-124页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基的配制 | 第124-128页 |
| 附录D 抗生素配制方法及使用浓度 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 个人简历 | 第130-131页 |
