| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1.1 C_3植物与C_4植物的比较 | 第15-17页 |
| 1.1.1 叶片解剖结构 | 第15-16页 |
| 1.1.2 叶绿体所含酶 | 第16页 |
| 1.1.3 光呼吸强度 | 第16-17页 |
| 1.2 C_3光合途径与C_4光合途径的可转变性 | 第17页 |
| 1.3 C_4光合途径关键酶的分子生物学研究进展 | 第17-21页 |
| 1.3.1 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) | 第17-19页 |
| 1.3.2 丙酮酸磷酸二激酶(PPDK) | 第19-20页 |
| 1.3.3 NADP-苹果酸酶(NADP-ME) | 第20页 |
| 1.3.4 转双基因及多基因的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 pepc基因在非生物逆境胁迫条件下的调控机理研究进展 | 第21-22页 |
| 1.5 拟南芥的生长条件和生理指标测定 | 第22-23页 |
| 1.5.1 拟南芥生物学特征及生长条件 | 第22-23页 |
| 1.5.2 拟南芥光合及PEPC酶活测定 | 第23页 |
| 1.6 根癌农杆菌介导的植物转基因研究进展 | 第23-24页 |
| 1.7 本课题研究意义 | 第24页 |
| 1.8 本课题前期工作基础 | 第24-25页 |
| 1.9 本课题研究目标和技术路线 | 第25-29页 |
| 1.9.1 课题研究目标 | 第25-26页 |
| 1.9.2 技术路线 | 第26-29页 |
| 第二章 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因在转基因拟南芥中的初步表达分析.. | 第29-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 大肠杆菌工程菌质粒 | 第29页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.2 试验方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 高表达的T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.2 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株PCR检测 | 第31-32页 |
| 2.2.3 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株RNA提取 | 第32页 |
| 2.2.4 拟南芥RNA质量检测 | 第32页 |
| 2.2.5 拟南芥RNA反转录 | 第32页 |
| 2.2.6 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株RT-PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.7 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的实时荧光定量PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-38页 |
| 2.3.1 高表达的T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.2 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株PCR电泳结果与分析 | 第35页 |
| 2.3.3 拟南芥RNA提取质量检测结果 | 第35-36页 |
| 2.3.4 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株RT-PCR电泳结果与分析 | 第36-37页 |
| 2.3.5 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株中pepc基因的表达结果与分析 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-41页 |
| 2.4.1 玉米pepc基因序列的同源性分析 | 第38页 |
| 2.4.2 pepc基因在转基因拟南芥中的表达量 | 第38页 |
| 2.4.3 植物叶片总RNA的提取优化 | 第38-39页 |
| 2.4.4 RT-PCR反应体系的优化 | 第39页 |
| 2.4.5 实时荧光定量PCR的问题及优化方案 | 第39-41页 |
| 第三章 转玉米C_4型光合关键酶基因pepc拟南芥植株的相应光合酶活性及光合生理效应测定 | 第41-53页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-44页 |
| 3.2.0 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性测定 | 第42-43页 |
| 3.2.1 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)活性测定 | 第43页 |
| 3.2.2 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株叶绿素含量及叶绿素荧光参数的测定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株光合与水分生理指标测定 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-50页 |
| 3.3.1 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株PEPC酶活性测定结果与分析 | 第44页 |
| 3.3.2 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株Rubisco酶活性测定结果与分析 | 第44-46页 |
| 3.3.3 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株叶绿素含量及叶绿素荧光参数的测定结果与分析 | 第46-47页 |
| 3.3.4 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株光合与水分生理指标测定结果与分析 | 第47-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-53页 |
| 3.4.1 转入玉米C_4型pepc基因对拟南芥光合速率的影响 | 第50-53页 |
| 第四章 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株抗旱性鉴定 | 第53-59页 |
| 4.1 材料 | 第53页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的SOD活性测定 | 第53-54页 |
| 4.2.2 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的POD活性测定 | 第54页 |
| 4.2.3 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的CAT活性测定 | 第54页 |
| 4.2.4 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的MDA、可溶性糖、可溶性蛋白含量测定 | 第54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.3.1 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的SOD、POD、CAT活性测定结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.3.2 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株的MDA、可溶性糖、可溶性蛋白含量测定结果与分析 | 第57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 4.4.1 干旱胁迫条件下,转入pepc基因对拟南芥保护酶活性的影响 | 第57-59页 |
| 第五章 pepc转基因烟草的获得及分子生物学鉴定 | 第59-69页 |
| 5.1 材料 | 第59-60页 |
| 5.1.1 受体材料 | 第59页 |
| 5.1.2 农杆菌工程菌 | 第59页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第59-60页 |
| 5.1.4 培养基 | 第60页 |
| 5.1.5 主要仪器设备 | 第60页 |
| 5.2 试验方法 | 第60-64页 |
| 5.2.1 无菌烟草的制备 | 第60页 |
| 5.2.2 根癌农杆菌菌种的培养和保存 | 第60-61页 |
| 5.2.3 根癌农杆菌侵染液的制备 | 第61页 |
| 5.2.4 侵染和共培养 | 第61页 |
| 5.2.5 脱菌培养和选择培养 | 第61-62页 |
| 5.2.6 生根培养 | 第62页 |
| 5.2.7 烟草pepc基因转化再生植株的分子生物学检测 | 第62-64页 |
| 5.3 结果与分析 | 第64-67页 |
| 5.3.1 根癌农杆菌介导的烟草pepc基因转化再生植株结果与分析 | 第64-65页 |
| 5.3.2 烟草pepc基因转化再生植株PCR检测结果与分析 | 第65-66页 |
| 5.3.3 烟草pepc基因转化再生植株RT-PCR检测结果与分析 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-69页 |
| 5.4.1 根癌农杆菌介导的植物遗传转化的方法 | 第67-68页 |
| 5.4.2 影响根癌农杆菌介导的烟草遗传转化的主要因素 | 第68-69页 |
| 第六章 总结论 | 第69-73页 |
| 6.1 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株分子生物学鉴定 | 第69页 |
| 6.2 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株光合生理生化检测 | 第69-70页 |
| 6.3 T_3代纯合pepc转基因拟南芥植株抗旱性鉴定 | 第70-71页 |
| 6.4 根癌农杆菌介导的pepc转基因烟草及分子生物学鉴定 | 第71页 |
| 6.5 下一步研究工作的设想 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 附录A | 第82-83页 |
| 附录B | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
