| 中文摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩略词 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第17-20页 |
| 1.2 双氯芬酸致肝脏毒性研究的国内外现状 | 第20-23页 |
| 1.2.1 双氯芬酸的活性代谢产物 | 第20页 |
| 1.2.2 双氯芬酸引起肝细胞毒性机制的研究现状 | 第20-21页 |
| 1.2.3 5 羟基-双氯芬酸与肝脏毒性 | 第21页 |
| 1.2.4 Tg CYP3A4/h PXR双转基因小鼠 | 第21-22页 |
| 1.2.5 代谢组学研究药物肝毒性 | 第22-23页 |
| 1.3 本实验的研究目标及内容 | 第23页 |
| 1.4 本研究的应用前景 | 第23-25页 |
| 第二章 TGCYP3A4/HPXR双转基因小鼠的引种、繁育及子代鉴定研究 | 第25-33页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.1.1 CYP3A4概述 | 第25页 |
| 2.1.2 PXR概述 | 第25-26页 |
| 2.1.3 本部分实验的概述 | 第26页 |
| 2.2 材料和方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 主要试剂和设备 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验动物引种及隔离检疫 | 第27页 |
| 2.2.3 饲养条件 | 第27页 |
| 2.2.4 动物识别 | 第27页 |
| 2.2.5 动物伦理与保护 | 第27页 |
| 2.2.6 Tg CYP3A4/h PXR子代鼠的繁育方法 | 第27-28页 |
| 2.2.7 子代鼠的鉴定 | 第28-30页 |
| 2.3 结果 | 第30-33页 |
| 第三章 TGCYP3A4/HPXR双转基因小鼠的药代动力学特性研究 | 第33-53页 |
| 3.1 引言 | 第33-35页 |
| 3.2 材料与设备 | 第35-36页 |
| 3.2.1 肝微粒 | 第35-36页 |
| 3.2.2 试剂 | 第36页 |
| 3.2.3 仪器 | 第36页 |
| 3.2.4 色谱分离检测条件 | 第36页 |
| 3.3 实验操作 | 第36-45页 |
| 3.3.1 实验动物的挑选、检疫、识别、饲养管理与福利 | 第36-37页 |
| 3.3.2 实验设计 | 第37-38页 |
| 3.3.3 血浆样品预处理 | 第38页 |
| 3.3.4 色谱-质谱条件 | 第38-39页 |
| 3.3.5 血浆样品处理 | 第39页 |
| 3.3.6 分析方法的确证 | 第39页 |
| 3.3.7 Tg3A4/h PXR双转基因小鼠肝微粒体的制备 | 第39-40页 |
| 3.3.8 微粒体的蛋白浓度测定 | 第40-41页 |
| 3.3.9 微粒体P450含量测定 | 第41页 |
| 3.3.10 双氯芬酸在Tg3A4/h PXR、Balb/c小鼠以及人肝微粒中的代谢稳定性 | 第41-42页 |
| 3.3.11 Tg CYP3A4/h PXR双转基因小鼠肝微粒体的抑制活性测定 | 第42-45页 |
| 3.4 数据处理 | 第45-46页 |
| 3.4.1 体内药代参数的数据处理 | 第45-46页 |
| 3.4.2 体外数据处理 | 第46页 |
| 3.5 结果 | 第46-53页 |
| 3.5.1 LC-MS/MS分析双氯芬酸的方法专属性 | 第46-48页 |
| 3.5.2 标准曲线和定量下限 | 第48页 |
| 3.5.3 血药浓度及药代参数 | 第48-49页 |
| 3.5.4 细胞色素P450酶含量的测定结果 | 第49-50页 |
| 3.5.5 双氯芬酸在Tg3A4/h PXR、Balb/c小鼠及人肝微粒体中的代谢稳定性 | 第50-52页 |
| 3.5.6 Tg3A4/h PXR双转基因小鼠P450酶 3A4/5 抑制反应的测定结果 | 第52-53页 |
| 第四章 双氯芬酸致TGCYP3A4/HPXR双转基因小鼠肝毒性表型的建立 | 第53-66页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 材料与方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 试剂及药品 | 第53页 |
| 4.2.2 仪器及软件 | 第53-54页 |
| 4.2.3 实验动物 | 第54页 |
| 4.3 实验操作 | 第54-58页 |
| 4.3.1 实验分组 | 第54页 |
| 4.3.2 动物检疫、适应、动物识别、动物伦理福利、饲养管理以及饲养环境 | 第54-55页 |
| 4.3.3 动物意外死亡和安乐死处理 | 第55页 |
| 4.3.4 实验设计与剂量设计 | 第55-56页 |
| 4.3.5 供试品的配制 | 第56页 |
| 4.3.6 给药 | 第56页 |
| 4.3.7 一般临床症状观察 | 第56页 |
| 4.3.8 样本采集 | 第56页 |
| 4.3.9 血清ALT和AST的测定 | 第56页 |
| 4.3.10 肝组织萃取 | 第56-57页 |
| 4.3.11 病理切片 | 第57-58页 |
| 4.3.12 数据统计分析 | 第58页 |
| 4.4 结果 | 第58-66页 |
| 4.4.1 临床观察 | 第58页 |
| 4.4.2 生化指标测定 | 第58-60页 |
| 4.4.3 病理检查结果 | 第60-66页 |
| 第五章 双氯芬酸致TG3A4/HPXR双转基因小鼠肝毒性的代谢组学研究 | 第66-76页 |
| 5.1 前言 | 第66-67页 |
| 5.2 实验材料与试剂 | 第67页 |
| 5.2.1 试剂 | 第67页 |
| 5.2.2 仪器 | 第67页 |
| 5.3 实验操作 | 第67-68页 |
| 5.3.1 液相分析的流动相组成 | 第67页 |
| 5.3.2 质谱正、负离子扫描条件 | 第67-68页 |
| 5.3.3 双氯芬酸和内标的质谱检测条件 | 第68页 |
| 5.3.4 血浆样品处理 | 第68页 |
| 5.4 数据分析与结果 | 第68-76页 |
| 5.4.1 血浆代谢物谱图OPLS-DA结果 | 第68-71页 |
| 5.4.2 潜在标记物的发现 | 第71-72页 |
| 5.4.3 差异性化合物的生物学功能分析 | 第72-76页 |
| 第六章 双氯芬酸及其代谢产物致TG3A4/HPXR双转基因小鼠免疫毒性的初步探讨 606.1 前言 | 第76-84页 |
| 6.1 前言 | 第76-77页 |
| 6.2 材料与方法 | 第77页 |
| 6.2.1 试剂 | 第77页 |
| 6.2.2 仪器 | 第77页 |
| 6.2.3 细胞来源 | 第77页 |
| 6.3 实验操作 | 第77-80页 |
| 6.3.1 原代干细胞的分离 | 第77-78页 |
| 6.3.2 原代肝细胞的培养 | 第78页 |
| 6.3.3 MTT法测定双氯芬酸及其代谢产物对细胞增殖的抑制率 | 第78-79页 |
| 6.3.4 外周血淋巴细胞的分离 | 第79页 |
| 6.3.5 外周血淋巴细胞的细胞培养 | 第79页 |
| 6.3.6 外周血淋巴细胞炎症因子的增值检测 | 第79-80页 |
| 6.4 结果 | 第80-84页 |
| 6.4.1 MTT法测定双氯芬酸、4’羟基-双氯芬酸、5 羟基-双氯芬酸对细胞增殖的抑制率 | 第80-81页 |
| 6.4.2 Tg3A4/h PXR 双转基因小鼠外周血炎症因子炎症因子测定结果 | 第81-84页 |
| 结论 | 第84-87页 |
| 展望 | 第87-94页 |
| 参考文献 | 第94-98页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 附件 | 第100页 |
