| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-23页 |
| 1.1 基因组编辑技术 | 第9-15页 |
| 1.1.1 锌指核酸酶技术 | 第10-11页 |
| 1.1.2 类转录激活因子效应物核酸酶技术 | 第11-12页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas9系统 | 第12-15页 |
| 1.2 几种常用的动物转基因技术 | 第15-17页 |
| 1.2.1 胚胎干细胞介导的囊胚注射法 | 第15-16页 |
| 1.2.2 基于受精卵的原核注射或胞质注射 | 第16页 |
| 1.2.3 体细胞核移植 | 第16-17页 |
| 1.3 基因组编辑技术的应用 | 第17-19页 |
| 1.3.1 研究基因功能 | 第17页 |
| 1.3.2 基因治疗 | 第17-18页 |
| 1.3.3 制备医学动物疾病模型 | 第18页 |
| 1.3.4 利用基因组编辑技术改良动物遗传性状 | 第18-19页 |
| 1.4 印记基因和细胞重编程 | 第19-21页 |
| 1.5 立题依据和研究意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| 2.1 材料 | 第23-31页 |
| 2.1.1 载体 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株、细胞系和小鼠品系 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 常用培养基和缓冲液的配制 | 第26-30页 |
| 2.1.6 引物序列(金唯智) | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-43页 |
| 2.2.1 打靶载体的制备 | 第31-35页 |
| 2.2.2 gRNA的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.3 小鼠成纤维细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.4 小鼠ES细胞培养 | 第38页 |
| 2.2.5 小鼠ES细胞电转染 | 第38-39页 |
| 2.2.6 阳性ES细胞筛选 | 第39-40页 |
| 2.2.7 ES细胞介导的囊胚注射及子宫移植 | 第40-41页 |
| 2.2.8 受精卵介导的原核注射及输卵管移植 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-51页 |
| 3.1 ES细胞介导的敲除小鼠制备结果 | 第43-47页 |
| 3.1.1 ES细胞水平CRISPR/Cas9系统介导的Kcnq1ot1基因敲除 | 第43-44页 |
| 3.1.2 gRNA构建结果 | 第44-45页 |
| 3.1.3 囊胚注射及嵌合体小鼠 | 第45-47页 |
| 3.2 受精卵原核注射介导的敲除小鼠制备的结果 | 第47-51页 |
| 3.2.1 胚胎水平载体构建及gRNA效率检测结果 | 第47-49页 |
| 3.2.2 原核注射结果 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 4.1 关于CRISPR/Cas9系统 | 第51-52页 |
| 4.2 制作动物模型方法的比较 | 第52页 |
| 4.3 动物模型 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第63-64页 |