| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 中英文缩略对照表 | 第11-19页 |
| 第一章 巨核细胞分化中的转录调控和信号转导机制 | 第19-31页 |
| 1.1 前言 | 第19页 |
| 1.2 血细胞生成与巨核细胞生成 | 第19-21页 |
| 1.2.1 血细胞生成 | 第19-20页 |
| 1.2.2 巨核细胞生成 | 第20-21页 |
| 1.3 GATA1是巨核细胞生成中的关键调控因子 | 第21-25页 |
| 1.3.1 GATA1简介 | 第21页 |
| 1.3.2 GATA1是巨核细胞生成的全局调控因子 | 第21-22页 |
| 1.3.3 GATA1和GATA2与相关疾病 | 第22-23页 |
| 1.3.4 GATA1的靶基因的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.4 TPO介导的信号通路在巨核细胞生成中的作用 | 第25-26页 |
| 1.5 JAK/STAT信号通路巨核细胞生成中的作用 | 第26-27页 |
| 1.6 MAPK/ERK信号通路与Src家族激酶在巨核细胞分化中的作用 | 第27-28页 |
| 1.7 PI3K/AKT信号通路与内质网应激在巨核细胞生成中的作用 | 第28-31页 |
| 第二章 巨核细胞分化相关基因筛选 | 第31-43页 |
| 2.1 前言 | 第31页 |
| 2.2 材料 | 第31-32页 |
| 2.2.1 细胞系 | 第31页 |
| 2.2.2 试剂 | 第31页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第31-32页 |
| 2.2.4 仪器和设备 | 第32页 |
| 2.3 方法 | 第32-39页 |
| 2.3.1 基因芯片的数据分析和交叉分析 | 第32-33页 |
| 2.3.2 ChIP-Seq数据的上传与分析 | 第33-34页 |
| 2.3.3 基因功能的在线预测以及分析 | 第34页 |
| 2.3.4 PCR引物的设计 | 第34页 |
| 2.3.5 细胞的复苏、冻存、培养、计数、诱导以及分化检测 | 第34-35页 |
| 2.3.6 RNA的提取以及cDNA反转录 | 第35-37页 |
| 2.3.7 定量PCR筛选候选基因 | 第37-39页 |
| 2.4 实验结果 | 第39-41页 |
| 2.4.1 候选基因名单的确定 | 第39-40页 |
| 2.4.2 K562细胞诱导分化 | 第40页 |
| 2.4.3 GATA1候选靶基因表达在K562细胞TPA诱导时表达变化 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 Pstpip2是GATA1的靶基因并参与巨核细胞分化 | 第43-75页 |
| 3.1 前言 | 第43页 |
| 3.2 材料 | 第43-48页 |
| 3.3 方法 | 第48-65页 |
| 3.3.1 感受态制备 | 第48-49页 |
| 3.3.2 感受态细菌的转化 | 第49页 |
| 3.3.3 PCR产物或质粒酶切产物的电泳检测以及胶回收 | 第49-50页 |
| 3.3.4 质粒的中量以及大量提取 | 第50-51页 |
| 3.3.5 基因组DNA的制备 | 第51-52页 |
| 3.3.6 限制性内切酶酶切 | 第52页 |
| 3.3.7 DNA片段和酶切质粒的连接 | 第52-53页 |
| 3.3.8 阳性克隆子的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.9 荧光素报道载体的构建 | 第54-56页 |
| 3.3.10 双荧光试验 | 第56-57页 |
| 3.3.11 ChIP-qPCR验证GATA1调控Pstpip2 | 第57-59页 |
| 3.3.12 PSTPIP2过表达载体的构建 | 第59页 |
| 3.3.13 PSTPIP2沉默载体的构建 | 第59-61页 |
| 3.3.14 贴壁细胞的消化和传代 | 第61页 |
| 3.3.15 包装细胞系的PEI转染 | 第61-62页 |
| 3.3.16 病毒包装与稳定细胞系的筛选 | 第62-63页 |
| 3.3.17 巨核细胞多倍体分析 | 第63-64页 |
| 3.3.18 免疫印迹法检测蛋白质的表达 | 第64-65页 |
| 3.3.19 数据处理与分析 | 第65页 |
| 3.4 结果 | 第65-73页 |
| 3.4.1 双荧光试验验证GATA1调控Pstpip2 | 第65-67页 |
| 3.4.2 ChIP-qPCR验证GATA1调控Pstpip2 | 第67-68页 |
| 3.4.3 G1ME细胞中定量PCR验证GATA1调控Pstpip2 | 第68-69页 |
| 3.4.4 K562细胞中GATA1以及PSTPIP2表达变化 | 第69页 |
| 3.4.5 人CD34阳性细胞体外分化过程中GATA1与PSTPIP2的变化情况 | 第69-70页 |
| 3.4.6 GATA1敲低小鼠巨核细胞中Pstpip2的表达 | 第70-71页 |
| 3.4.7 PSTPIP2的过表达抑制了TPA诱导的K562巨核细胞分化 | 第71-72页 |
| 3.4.8 PSTPIP2的沉默促进K562细胞的巨核细胞分化 | 第72-73页 |
| 3.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第四章 PSTPIP2调控巨核细胞分化的分子机制 | 第75-83页 |
| 4.1 前言 | 第75页 |
| 4.2 材料 | 第75-76页 |
| 4.2.1 菌株 | 第75页 |
| 4.2.2 细胞系 | 第75页 |
| 4.2.3 质粒 | 第75页 |
| 4.2.4 引物合成及序列测定 | 第75页 |
| 4.2.5 试剂 | 第75-76页 |
| 4.2.6 仪器和设备 | 第76页 |
| 4.3 方法 | 第76-77页 |
| 4.3.1 PSTPIP2突变体过表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 4.3.2 K562细胞的双病毒感染 | 第77页 |
| 4.3.3 免疫共沉淀实验(IP) | 第77页 |
| 4.4 结果 | 第77-80页 |
| 4.4.1 Y323/333F、W232A突变对PSTPIP2调控巨核细胞分化的影响 | 第77-79页 |
| 4.4.2 PSTPIP2调控巨核细胞分化是通过促进LYN的磷酸化来实现的 | 第79-80页 |
| 4.4.3 组成型失活LYN对PSTPIP2调控的巨核细胞分化的影响 | 第80页 |
| 4.5 本章小结 | 第80-83页 |
| 第五章 PSTPIP2抑制TPO介导的巨核细胞增殖和分化 | 第83-95页 |
| 5.1 前言 | 第83页 |
| 5.2 材料 | 第83-85页 |
| 5.2.1 菌株 | 第83页 |
| 5.2.2 细胞系 | 第83页 |
| 5.2.3 质粒 | 第83页 |
| 5.2.4 引物合成及序列测定 | 第83页 |
| 5.2.5 试剂 | 第83页 |
| 5.2.6 试剂配制 | 第83-84页 |
| 5.2.7 仪器和设备 | 第84-85页 |
| 5.3 方法 | 第85-88页 |
| 5.3.1 G1ME细胞的培养和感染 | 第85页 |
| 5.3.2 G1ME细胞的细胞周期分析 | 第85-86页 |
| 5.3.3 G1ME细胞的细胞增殖分析 | 第86页 |
| 5.3.4 G1ME细胞的细胞凋亡分析 | 第86页 |
| 5.3.5 骨髓原代细胞的获取与活化 | 第86-87页 |
| 5.3.6 原代骨髓细胞定向巨核细胞分化培养 | 第87页 |
| 5.3.7 克隆形成单位试验 | 第87-88页 |
| 5.4 结果 | 第88-94页 |
| 5.4.1 PSTPIP2对G1ME细胞的增殖以及分化的影响 | 第88-89页 |
| 5.4.2 ERK磷酸化以及SFK磷酸化对巨核细胞分化的影响 | 第89-90页 |
| 5.4.3 PSTPIP2的过表达对G1ME细胞凋亡的影响 | 第90-91页 |
| 5.4.4 PSTPIP2的过表达对G1ME细胞周期的影响 | 第91-93页 |
| 5.4.5 PSTPIP2抑制原代巨核细胞集落形成和巨核细胞分化 | 第93-94页 |
| 5.5 本章小结 | 第94-95页 |
| 第六章 TMCC2是GATA1的靶基因并促进巨核细胞分化 | 第95-105页 |
| 6.1 前言 | 第95页 |
| 6.2 材料 | 第95-96页 |
| 6.2.1 菌株 | 第95页 |
| 6.2.2 细胞系 | 第95页 |
| 6.2.3 质粒 | 第95页 |
| 6.2.4 引物合成及序列测定 | 第95页 |
| 6.2.5 试剂 | 第95页 |
| 6.2.6 试剂配制 | 第95页 |
| 6.2.7 仪器和设备 | 第95-96页 |
| 6.3 方法 | 第96-98页 |
| 6.3.1 CMK、K562和G1ME细胞分化诱导 | 第96页 |
| 6.3.2 ChIP-qPCR验证GATA1结合于TMCC2内含子上 | 第96页 |
| 6.3.3 定量PCR检测G1ME细胞中GATA1对TMCC2的调控 | 第96页 |
| 6.3.4 定量PCR检测TMCC2在人CD34阳性细胞体外巨核细胞分化过程中的表达变化 | 第96页 |
| 6.3.5 免疫印迹法检测TMCC2在各组织中的表达情况 | 第96-97页 |
| 6.3.6 TMCC2过表达载体的构建 | 第97页 |
| 6.3.7 TMCC2过表达稳定细胞系的构建以及表型分析 | 第97-98页 |
| 6.4 结果 | 第98-102页 |
| 6.4.1 TMCC2在小鼠组织中的表达情况 | 第98页 |
| 6.4.2 TMCC2参与K562、CMK的巨核细胞分化 | 第98-99页 |
| 6.4.3 TMCC2参与人CD34阳性细胞向巨核细胞分化 | 第99页 |
| 6.4.4 GATA1调控Tmcc2的表达 | 第99-100页 |
| 6.4.5 GATA1结合于TMCC2基因1号内含子上 | 第100页 |
| 6.4.6 TMCC2促进了K562的巨核细胞分化 | 第100-101页 |
| 6.4.7 TMCC2基因rs1668871位点上单碱基多态性与巨核细胞分化相关性分析 | 第101-102页 |
| 6.5 本章小结 | 第102-105页 |
| 第七章 TMCC2调控巨核细胞分化的分子机制 | 第105-117页 |
| 7.1 前言 | 第105页 |
| 7.2 材料 | 第105-106页 |
| 7.2.1 菌株 | 第105页 |
| 7.2.2 细胞系 | 第105页 |
| 7.2.3 引物合成及序列测定 | 第105页 |
| 7.2.4 试剂 | 第105-106页 |
| 7.2.5 试剂配制 | 第106页 |
| 7.2.6 仪器和设备 | 第106页 |
| 7.3 方法 | 第106-107页 |
| 7.3.1 Confocal实验验证TMCC2的亚细胞定位 | 第106页 |
| 7.3.2 细胞计数以及免疫印迹法检测信号通路的变化 | 第106-107页 |
| 7.3.3 细胞诱导时的抑制剂实验 | 第107页 |
| 7.3.4 MEF细胞的感染以及抗性筛选 | 第107页 |
| 7.4 结果 | 第107-116页 |
| 7.4.1 TMCC2定位于细胞质 | 第107页 |
| 7.4.2 TMCC2增强AKT信号通路 | 第107-109页 |
| 7.4.3 TMCC2与S6K相互作用 | 第109页 |
| 7.4.4 AKT磷酸化促进了K562的巨核细胞分化 | 第109-110页 |
| 7.4.5 AKT磷酸化是G1ME巨核细胞分化所需要的 | 第110-112页 |
| 7.4.6 AKT磷酸化是TMCC2介导巨核细胞分化所需要的 | 第112页 |
| 7.4.7 AKT调控巨核细胞分化部分是通过磷酸化GATA1来实现的 | 第112-114页 |
| 7.4.8 内质网应激参与巨核细胞分化 | 第114-115页 |
| 7.4.9 TMCC2部分通过ER-Stress促进巨核细胞分化 | 第115-116页 |
| 7.5 本章小结 | 第116-117页 |
| 讨论与展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-125页 |
| 博士期间发表及待发表的论文 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
