| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 国内外悬铃木研究现状 | 第13-14页 |
| 1.3 悬铃木的花发育过程及其研究意义 | 第14-15页 |
| 1.3.1 悬铃木花发育的过程 | 第14-15页 |
| 1.3.2 悬铃木花发育研究的分子生物学意义 | 第15页 |
| 1.4 植物花的形成与发育 | 第15-31页 |
| 1.4.1 开花诱导(Floral initiation) | 第15-19页 |
| 1.4.2 花分生组织决定(Floral meristem identity) | 第19-24页 |
| 1.4.3 花器官发育(Floral organ development) | 第24-30页 |
| 1.4.4 花发育基因的调控网络 | 第30-31页 |
| 1.5 花发育相关基因在植物性状改良中的应用 | 第31页 |
| 1.5.1 开花时间的调节 | 第31页 |
| 1.5.2 花型的改变 | 第31页 |
| 1.5.3 创造不育植株 | 第31页 |
| 1.6 本课题的研究目的与意义 | 第31-34页 |
| 第二章 农杆菌介导的悬铃木遗传转化体系的优化 | 第34-38页 |
| 2.1 前言 | 第34页 |
| 2.2 材料与方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1 转化受体材料 | 第34页 |
| 2.2.2 转化载体及培养方法 | 第34页 |
| 2.2.3 悬铃木的遗传转化方法 | 第34-36页 |
| 2.4 结果与分析 | 第36-37页 |
| 2.4.1 头孢霉素和Timentin抑菌效果比较 | 第36页 |
| 2.4.2 转化效率 | 第36-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 悬铃木雌花噬菌体cDNA文库的构建 | 第38-48页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料 | 第38页 |
| 3.2.1 试验材料与处理 | 第38页 |
| 3.2.2 RNA提取所用试剂 | 第38页 |
| 3.2.3 其它主要试剂 | 第38页 |
| 3.3 方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 RNA的提取、纯化及mRNA分离 | 第38-41页 |
| 3.3.2 cDNA合成 | 第41页 |
| 3.3.3 cDNA与载体连接 | 第41页 |
| 3.3.4 体外包装、效价测定与文库扩增 | 第41-42页 |
| 3.3.5 测序和数据分析 | 第42页 |
| 3.4 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.4.1 总RNA抽提及mRNA分离 | 第42-44页 |
| 3.4.2 双链cDNA合成 | 第44页 |
| 3.4.3 文库质量检测 | 第44-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-48页 |
| 3.5.1 RNA提取 | 第46-47页 |
| 3.5.2 文库构建 | 第47-48页 |
| 第四章 悬铃木花发育相关基因的克隆及表达分析 | 第48-81页 |
| 4.1 前言 | 第48页 |
| 4.2 材料 | 第48页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第48页 |
| 4.2.2 菌株和载体 | 第48页 |
| 4.2.3 主要分子生物学试剂 | 第48页 |
| 4.3 方法 | 第48-54页 |
| 4.3.1 RACEs | 第48-50页 |
| 4.3.2 扩增产物克隆及序列测定 | 第50-51页 |
| 4.3.3 RT-PCR克隆悬铃木看家基因actin | 第51页 |
| 4.3.4 全长cDNA序列分析 | 第51页 |
| 4.3.5 基因组织/器官异性表达分析 | 第51页 |
| 4.3.6 RT-PCR分析七个花发育相关基因的表达 | 第51-52页 |
| 4.3.7 两步法定量RT-PCR分析基因表达水平(Real-time PCR) | 第52-54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-80页 |
| 4.4.1 悬铃木看家基因Actin的克隆 | 第54页 |
| 4.4.2 悬铃木花发育相关基因的克隆 | 第54-74页 |
| 4.4.3 悬铃木花发育特异基因的表达分析 | 第74-80页 |
| 4.5 讨论 | 第80-81页 |
| 第五章 悬铃木花发育特异基因的功能验证 | 第81-85页 |
| 5.1 前言 | 第81页 |
| 5.2 材料 | 第81页 |
| 5.2.1 转化受体材料 | 第81页 |
| 5.2.2 菌株和载体 | 第81页 |
| 5.3 方法 | 第81-82页 |
| 5.3.1 Sense植物表达载体的构建 | 第81-82页 |
| 5.3.2 转化烟草分析基因的异源表达 | 第82页 |
| 5.4 结果与分析 | 第82-85页 |
| 5.4.1 植物正义(超量)表达遗传转化载体的构建 | 第82-84页 |
| 5.4.2 转基因烟草植株的分子分析 | 第84页 |
| 5.4.3 转基因烟草开花时间及花型分析 | 第84-85页 |
| 第六章 悬铃木遗传进化地位研究 | 第85-97页 |
| 6.1 前言 | 第85页 |
| 6.2 材料与方法 | 第85页 |
| 6.3 结果与分析 | 第85-88页 |
| 6.3.1 AP1/SQUA-like亚家族 | 第85-86页 |
| 6.3.2 AP3/PI-like(DEF/GLO)亚家族 | 第86-87页 |
| 6.3.3 AG-like亚家族 | 第87页 |
| 6.3.4 SEP亚家族 | 第87-88页 |
| 6.3.5 悬铃木进化地位 | 第88页 |
| 6.4 讨论 | 第88-97页 |
| 第七章 悬铃木选择压力及生物钟分析 | 第97-105页 |
| 7.1 前言 | 第97页 |
| 7.2 材料与方法 | 第97-98页 |
| 7.3 结果与分析 | 第98-105页 |
| 7.3.1 悬铃木A-,B-,C-,E-类MADs-box基因选择压力分析 | 第98-104页 |
| 7.3.2 悬铃木分子生物钟分析 | 第104-105页 |
| 第八章 讨论与展望 | 第105-108页 |
| 8.1 生物信息学与悬铃木基因克隆 | 第105页 |
| 8.2 悬铃木基因的多拷贝现象 | 第105页 |
| 8.3 悬铃木的进化地位 | 第105-106页 |
| 8.4 悬铃木PaFUL、PaAP3、PaAG、PaSEP1和PaSEP3受到的自然选择 | 第106-107页 |
| 8.5 悬铃木分子生物钟分析 | 第107页 |
| 8.6 悬铃木不育系的诱导 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-124页 |
| 附录 | 第124-159页 |
| 附录Ⅰ:缩略词表 | 第124-125页 |
| 附录Ⅱ:本研究所用到的基因信息 | 第125-152页 |
| 附表2-1:本研究用到的LFY同源基因 | 第125-126页 |
| 附表2-2:本研究用到的A-类MADS-box同源基因 | 第126-133页 |
| 附表2-3:本研究用到的B-类MADS-box同源基因 | 第133-141页 |
| 附表2-4:本研究用到的C/D-类MADS-box同源基因 | 第141-146页 |
| 附表2-5:本研究用到的E-类MADS-box同源基因 | 第146-152页 |
| 附表2-6:本研究用到其它MADS-box同源基因 | 第152页 |
| 附录Ⅲ:悬铃木看家基因PaActin的核苷酸序列 | 第152-153页 |
| 附录Ⅳ:Genebank注册基因信息 | 第153-157页 |
| 附录Ⅴ:博士期间发表论文及相关成果等情况 | 第157-159页 |
| 致谢 | 第159页 |
