| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 研究背景 | 第13-25页 |
| 1.1 链霉菌 | 第13-16页 |
| 1.1.1 链霉菌简介 | 第13页 |
| 1.1.2 链霉菌的生长发育 | 第13-14页 |
| 1.1.3 链霉菌的基因组和次级代谢产物 | 第14-15页 |
| 1.1.4 链霉菌生物合成的调控机制 | 第15-16页 |
| 1.2 双组份信号转导系统 | 第16-23页 |
| 1.2.1 双组份信号转导系统的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.2 双组份信号转导系统的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 双组份信号转导系统的特点 | 第19-21页 |
| 1.2.4 双组份信号转导系统对生命活动的调控 | 第21页 |
| 1.2.5 天蓝色链霉菌中双组份信号转导系统的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3 立题依据与研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第25-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-34页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25-26页 |
| 2.1.2 质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.3 引物 | 第27-29页 |
| 2.1.4 培养基与试剂 | 第29-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-55页 |
| 2.2.1 天蓝色链霉菌的培养及菌种的保藏 | 第34页 |
| 2.2.2 天蓝色链霉菌总基因组的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.3 天蓝色链霉菌基因缺失突变株△2120的构建 | 第35-38页 |
| 2.2.3.1 双交换缺失突变重组质粒的构建 | 第35页 |
| 2.2.3.2 大肠杆菌与链霉菌属间接合转移 | 第35-37页 |
| 2.2.3.3 双交换基因缺失突变株的筛选和鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.4 △2120回补菌株的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.4.1 以pSET152为载体回补△2120 | 第38-39页 |
| (1) 回补菌株△2120/pSET2120的构建 | 第38页 |
| (2) 回补菌株△2120/pSET2120-2121的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.4.2 以pHLY12为载体回补△2120 | 第39-40页 |
| 2.2.5 天蓝色链霉菌的表型分析 | 第40-42页 |
| 2.2.5.1 天蓝色链霉菌的固体培养 | 第40页 |
| 2.2.5.2 天蓝色链霉菌中钙依赖性抗生素(CDA)的检测 | 第40-41页 |
| 2.2.5.3 放线紫红素和十一烷基灵菌红素的含量测定 | 第41页 |
| 2.2.5.4 天蓝色链霉菌孢子表面形态观察 | 第41-42页 |
| 2.2.6 天蓝色链霉菌RNA的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.7 天蓝色链霉菌野生型M145与突变株△2120的转录组分析 | 第43-44页 |
| 2.2.8 His-2120融合蛋白的表达与纯化 | 第44-45页 |
| 2.2.9 GST-2120融合蛋白的表达与纯化 | 第45-47页 |
| 2.2.10 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第47-48页 |
| 2.2.11 SCO2120的体外结合试验 | 第48-50页 |
| 2.2.12 带His-tag基因工程菌株的构建 | 第50-52页 |
| (1) △2120/pMS2120-1的构建 | 第51-52页 |
| (2) △2120/pMS2120-2的构建 | 第52页 |
| 2.2.13 天蓝色链霉菌总蛋白的提取 | 第52-53页 |
| 2.2.14 蛋白杂交分析(Western Blot) | 第53-55页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第55-87页 |
| 3.1 sco2120突变菌株的构建 | 第55-59页 |
| 3.1.1 敲除质粒的构建 | 第55-58页 |
| 3.1.2 △2120的验证 | 第58-59页 |
| 3.2 △2120的表型分析 | 第59-63页 |
| 3.2.1 △2120在不同培养基中的生长情况 | 第59-61页 |
| 3.2.2 △2120的产素分析 | 第61-63页 |
| 3.2.3 △2120的孢子发育 | 第63页 |
| 3.3 △2120的基因互补 | 第63-68页 |
| 3.3.1 回补质粒的构建 | 第63-66页 |
| 3.3.1.1 以pSET152为载体构建回补质粒 | 第63-65页 |
| 3.3.1.2 以pHLY12为载体构建回补质粒 | 第65-66页 |
| 3.3.2 回补菌株的构建 | 第66-68页 |
| 3.3.2.1 以pSET152为载体的回补菌株的构建 | 第66-68页 |
| 3.3.2.2 △2120/pHLY2120的构建 | 第68页 |
| 3.4 回补菌株的表型分析 | 第68-72页 |
| 3.4.1 以pSET 152为载体的回补菌株的表型分析 | 第68-72页 |
| 3.4.1.1 △2120/pSET 2120的表型分析 | 第68-69页 |
| 3.4.1.2 △2120/pSET 2120-2121的表型分析 | 第69-72页 |
| 3.5 M145与A2120的转录组分析 | 第72-74页 |
| 3.6 SCO2120融合蛋白的表达 | 第74-77页 |
| 3.6.1 His-2120融合蛋白的表达和纯化 | 第75-76页 |
| 3.6.2 GST-2120融合蛋白的表达和纯化 | 第76-77页 |
| 3.7 SCO2120的体外结合试验 | 第77-81页 |
| 3.7.1 SCO2120结合actⅡ- ORF4的启动子 | 第77-78页 |
| 3.7.2 SCO2120结合redZ启动子 | 第78-79页 |
| 3.7.3 SCO2120结合cdaR启动子 | 第79-80页 |
| 3.7.4 SCO2120与其它基因启动子的结合情况 | 第80-81页 |
| 3.8 SCO2120结合位点的分析 | 第81-82页 |
| 3.9 带His-tag基因工程菌株的构建 | 第82-85页 |
| 3.9.1 构建重组质粒 | 第82-84页 |
| 3.9.1.1 pMS2120-1的构建 | 第82-83页 |
| 3.9.1.2 pMS2120-2的构建 | 第83-84页 |
| 3.9.2 构建基因工程菌株 | 第84-85页 |
| 3.9.2.1 △2120/pMS2120-1的构建 | 第84-85页 |
| 3.9.2.2 △2120/pMS2120-2的构建 | 第85页 |
| 3.10 △2120/pMS2120-2总蛋白的提取和蛋白杂交分析(Western Blot) | 第85-87页 |
| 第四章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 4.1 全文总结 | 第87-88页 |
| 4.2 研究展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 附件 | 第95页 |
