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南方水稻黑条矮缩病毒SRBSDV运动蛋白的鉴定及功能分析

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
文献综述第11-18页
    1 南方水稻黑条矮缩病研究进展第11-14页
        1.1 南方水稻黑条矮缩病的发病情况第11页
        1.2 南方水稻黑条矮缩病的症状第11页
        1.3 SRBSDV的寄主及传毒介体第11-12页
        1.4 SRBSDV的分类地位第12页
        1.5 SRBSDV的基因组结构与功能第12-14页
    2 运动蛋白的研究概况第14-16页
        2.1 植物病毒的移动第14页
        2.2 运动蛋白的作用方式第14-15页
        2.3 MP蛋白介导病毒在细胞间运动的机制第15页
        2.4 MP蛋白在病毒长距离运输中的作用第15-16页
        2.5 MP蛋白介导的植物抗病性第16页
    3 蛋白互作技术第16-17页
        3.1 双分子荧光互补技术第16页
        3.2 酵母双杂交技术第16-17页
    4 原核表达和蛋白纯化第17-18页
引言第18-19页
材料与方法第19-25页
    1 供试材料第19页
        1.1 病样来源第19页
        1.2 植物材料第19页
        1.3 菌种和载体第19页
        1.4 酶和化学试剂第19页
        1.5 抗生素第19页
    2 试验方法第19-25页
        2.1 叶片总RNA的提取第19页
        2.2 cDNA的合成第19页
        2.3 PCR技术第19页
        2.4 PCR产物的克隆第19-20页
            2.4.1 PCR产物回收和纯化第19-20页
            2.4.2 PCR产物的连接第20页
            2.4.3 感受态细胞的制备第20页
            2.4.4 连接产物的转化第20页
            2.4.5 阳性克隆的PCR鉴定第20页
            2.4.6 质粒提取第20页
        2.5 重组质粒的鉴定第20页
        2.6 农杆菌浸润接种第20页
        2.7 SRBSDV mp基因的鉴定第20-22页
            2.7.1 引物设计第20-21页
            2.7.2 目的片段的克隆第21页
            2.7.3 植物表达载体的构建第21-22页
            2.7.4 植物表达载体转入农杆菌第22页
            2.7.5 农杆菌浸润接种第22页
            2.7.6 共聚焦显微镜观察第22页
        2.8 SRBSDV S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作第22-24页
            2.8.1 引物设计第22-23页
            2.8.2 双分子荧光互补(BiFC)表达载体的构建第23页
            2.8.3 农杆菌转化及浸润接种第23页
            2.8.4 共聚焦显微镜观察第23页
            2.8.5 酵母双杂交(Y2H)表达载体的构建第23页
            2.8.6 酵母双杂交第23-24页
        2.9 SRBSDV S7-1 基因的原核表达第24-25页
            2.9.1 SRBSDV S7-1 基因的克隆第24页
            2.9.2 原核表达载体的构建第24页
            2.9.3 重组蛋白的表达、纯化第24-25页
结果与分析第25-37页
    1 SRBSDV mp基因的鉴定第25页
        1.1 SRBSDV S5-2、S7-1、S7-2 和S9-2 基因的克隆第25页
        1.2 MP蛋白的亚细胞定位第25页
    2 重组表达载体的构建第25-32页
        2.1 MP蛋白在烟草表皮细胞中的定位第26-28页
        2.2 MP蛋白在本细胞间的运动第28-29页
        2.3 MP与PVX(△P25)-GFP的功能互补第29-32页
            2.3.1 SRBSDV S5-2、S7-1、S7-2、S9-2 植物表达载体的构建第29-30页
            2.3.2 PVX(△P25)-GFP农杆菌最佳稀释浓度的确定第30-31页
            2.3.3 MP蛋白与PVX(△P25)-GFP的功能互补第31-32页
    3 SRBSDV S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作第32-35页
        3.1 BiFC验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作第32-34页
            3.1.1 BiFC表达载体构建第32-34页
            3.1.2 BiFC验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作第34页
        3.2 酵母双杂交验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作第34-35页
            3.2.1 载体构建第34页
            3.2.2 Y2H验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作第34-35页
    4 SRBSDV S7-1 基因的原核表达和纯化第35-37页
        4.1 SRBSDV S7-1 基因的克隆及其原核表达载体的构建第35-36页
        4.2 重组蛋白的表达与纯化第36-37页
讨论第37-39页
结论第39-40页
参考文献第40-44页
致谢第44-45页
作者简介第45页

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