中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
文献综述 | 第11-18页 |
1 南方水稻黑条矮缩病研究进展 | 第11-14页 |
1.1 南方水稻黑条矮缩病的发病情况 | 第11页 |
1.2 南方水稻黑条矮缩病的症状 | 第11页 |
1.3 SRBSDV的寄主及传毒介体 | 第11-12页 |
1.4 SRBSDV的分类地位 | 第12页 |
1.5 SRBSDV的基因组结构与功能 | 第12-14页 |
2 运动蛋白的研究概况 | 第14-16页 |
2.1 植物病毒的移动 | 第14页 |
2.2 运动蛋白的作用方式 | 第14-15页 |
2.3 MP蛋白介导病毒在细胞间运动的机制 | 第15页 |
2.4 MP蛋白在病毒长距离运输中的作用 | 第15-16页 |
2.5 MP蛋白介导的植物抗病性 | 第16页 |
3 蛋白互作技术 | 第16-17页 |
3.1 双分子荧光互补技术 | 第16页 |
3.2 酵母双杂交技术 | 第16-17页 |
4 原核表达和蛋白纯化 | 第17-18页 |
引言 | 第18-19页 |
材料与方法 | 第19-25页 |
1 供试材料 | 第19页 |
1.1 病样来源 | 第19页 |
1.2 植物材料 | 第19页 |
1.3 菌种和载体 | 第19页 |
1.4 酶和化学试剂 | 第19页 |
1.5 抗生素 | 第19页 |
2 试验方法 | 第19-25页 |
2.1 叶片总RNA的提取 | 第19页 |
2.2 cDNA的合成 | 第19页 |
2.3 PCR技术 | 第19页 |
2.4 PCR产物的克隆 | 第19-20页 |
2.4.1 PCR产物回收和纯化 | 第19-20页 |
2.4.2 PCR产物的连接 | 第20页 |
2.4.3 感受态细胞的制备 | 第20页 |
2.4.4 连接产物的转化 | 第20页 |
2.4.5 阳性克隆的PCR鉴定 | 第20页 |
2.4.6 质粒提取 | 第20页 |
2.5 重组质粒的鉴定 | 第20页 |
2.6 农杆菌浸润接种 | 第20页 |
2.7 SRBSDV mp基因的鉴定 | 第20-22页 |
2.7.1 引物设计 | 第20-21页 |
2.7.2 目的片段的克隆 | 第21页 |
2.7.3 植物表达载体的构建 | 第21-22页 |
2.7.4 植物表达载体转入农杆菌 | 第22页 |
2.7.5 农杆菌浸润接种 | 第22页 |
2.7.6 共聚焦显微镜观察 | 第22页 |
2.8 SRBSDV S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作 | 第22-24页 |
2.8.1 引物设计 | 第22-23页 |
2.8.2 双分子荧光互补(BiFC)表达载体的构建 | 第23页 |
2.8.3 农杆菌转化及浸润接种 | 第23页 |
2.8.4 共聚焦显微镜观察 | 第23页 |
2.8.5 酵母双杂交(Y2H)表达载体的构建 | 第23页 |
2.8.6 酵母双杂交 | 第23-24页 |
2.9 SRBSDV S7-1 基因的原核表达 | 第24-25页 |
2.9.1 SRBSDV S7-1 基因的克隆 | 第24页 |
2.9.2 原核表达载体的构建 | 第24页 |
2.9.3 重组蛋白的表达、纯化 | 第24-25页 |
结果与分析 | 第25-37页 |
1 SRBSDV mp基因的鉴定 | 第25页 |
1.1 SRBSDV S5-2、S7-1、S7-2 和S9-2 基因的克隆 | 第25页 |
1.2 MP蛋白的亚细胞定位 | 第25页 |
2 重组表达载体的构建 | 第25-32页 |
2.1 MP蛋白在烟草表皮细胞中的定位 | 第26-28页 |
2.2 MP蛋白在本细胞间的运动 | 第28-29页 |
2.3 MP与PVX(△P25)-GFP的功能互补 | 第29-32页 |
2.3.1 SRBSDV S5-2、S7-1、S7-2、S9-2 植物表达载体的构建 | 第29-30页 |
2.3.2 PVX(△P25)-GFP农杆菌最佳稀释浓度的确定 | 第30-31页 |
2.3.3 MP蛋白与PVX(△P25)-GFP的功能互补 | 第31-32页 |
3 SRBSDV S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作 | 第32-35页 |
3.1 BiFC验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作 | 第32-34页 |
3.1.1 BiFC表达载体构建 | 第32-34页 |
3.1.2 BiFC验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作 | 第34页 |
3.2 酵母双杂交验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作 | 第34-35页 |
3.2.1 载体构建 | 第34页 |
3.2.2 Y2H验证S7-1 表达蛋白的自身互作及其与CP蛋白的互作 | 第34-35页 |
4 SRBSDV S7-1 基因的原核表达和纯化 | 第35-37页 |
4.1 SRBSDV S7-1 基因的克隆及其原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
4.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第36-37页 |
讨论 | 第37-39页 |
结论 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-44页 |
致谢 | 第44-45页 |
作者简介 | 第45页 |