| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 前言 | 第15-41页 |
| 1.1 糖苷水解酶简介 | 第15-29页 |
| 1.1.1 木聚糖和木聚糖酶 | 第16-24页 |
| 1.1.2 纤维素和纤维素酶 | 第24-29页 |
| 1.2 酯水解酶简介 | 第29-35页 |
| 1.2.1 类磷酸三酯酶的内酯酶 | 第29-33页 |
| 1.2.2 脂肪酶 | 第33-35页 |
| 1.3 主要研究方法介绍 | 第35-38页 |
| 1.3.1 X-ray 衍射晶体学 | 第35-36页 |
| 1.3.2 同源建模 | 第36页 |
| 1.3.3 分子动力学模拟 | 第36-37页 |
| 1.3.4 分子对接 | 第37页 |
| 1.3.5 差示热量扫描 | 第37页 |
| 1.3.6 等温量热滴定 | 第37-38页 |
| 1.4 立题依据 | 第38-41页 |
| 第二章 嗜热木聚糖酶 CbXyn10B 的克隆、表达、酶学性质表征及晶体结构解析 | 第41-87页 |
| 2.1 引言 | 第41页 |
| 2.2 材料和试剂 | 第41-45页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第41-42页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第42页 |
| 2.2.3 主要软件 | 第42页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第42-43页 |
| 2.2.5 溶液配制 | 第43-45页 |
| 2.2.6 常用培养基 | 第45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-53页 |
| 2.3.1 CbXyn10B 的序列分析 | 第45页 |
| 2.3.2 CbXyn10B 及其突变体的构建 | 第45-47页 |
| 2.3.3 CbXyn10B 的表达和纯化 | 第47-48页 |
| 2.3.4 活力测定 | 第48-49页 |
| 2.3.5 定点饱和突变库的筛选 | 第49-50页 |
| 2.3.6 CbXyn10B 的基本酶学性质表征 | 第50-51页 |
| 2.3.7 CbXyn10B 及其突变体的热力学稳定性分析 | 第51页 |
| 2.3.8 CbXyn10B 晶体的制备与储存 | 第51-52页 |
| 2.3.9 晶体衍射数据的收集和三维结构的解析 | 第52-53页 |
| 2.3.10 分子动力学模拟 | 第53页 |
| 2.4 结果与分析 | 第53-85页 |
| 2.4.1 CbXyn10B 的序列分析 | 第53-55页 |
| 2.4.2 CbXyn10B 的表达与纯化 | 第55-56页 |
| 2.4.3 CbXyn10B 酶学性质表征 | 第56-65页 |
| 2.4.4 CbXyn10B 及其酶-底物复合物晶体结构的分析 | 第65-72页 |
| 2.4.5 CbXyn10B 结构稳定的因素 | 第72-82页 |
| 2.4.6 CbXyn10B 活性中心+2 亚位点的功能研究 | 第82-85页 |
| 2.5 小结 | 第85-87页 |
| 第三章 嗜热木聚糖酶 CbX 的克隆、表达、酶学性质表征及其结构域模块功能的研究 | 第87-103页 |
| 3.1 引言 | 第87-88页 |
| 3.2 材料和试剂 | 第88页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第88页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第88页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第88页 |
| 3.2.4 溶液配制 | 第88页 |
| 3.2.5 常用培养基 | 第88页 |
| 3.3 实验方法 | 第88-93页 |
| 3.3.1 CbX 的结构序列分析 | 第88-89页 |
| 3.3.2 CbX 及其截短突变体重组质粒的构建 | 第89-91页 |
| 3.3.3 CbX 及其截短突变体的表达与纯化 | 第91页 |
| 3.3.4 活力测定 | 第91-92页 |
| 3.3.5 CbX 及其截短突变体的基本酶学性质表征 | 第92页 |
| 3.3.6 CbX 及其截短突变体的动力学稳定性测定 | 第92页 |
| 3.3.7 CbX 及其截短突变体的热力学稳定性测定 | 第92-93页 |
| 3.3.8 CbX 及其截短突变体的表观动力学参数测定 | 第93页 |
| 3.3.9 等温量热滴定 | 第93页 |
| 3.4 结果与分析 | 第93-102页 |
| 3.4.1 CbX 的结构序列分析 | 第93-96页 |
| 3.4.2 CbX 及其截短突变体的表达与纯化 | 第96页 |
| 3.4.3 CbX 及其截短突变体的基本酶学性质表征 | 第96-98页 |
| 3.4.4 CbX 及其截短突变体的动力学稳定性 | 第98-99页 |
| 3.4.5 CbX 及其截短突变体的热力学稳定性 | 第99-100页 |
| 3.4.6 CbX 及其截短突变体表观动力学常数比较 | 第100-101页 |
| 3.4.7 CbX-CBM 的功能 | 第101-102页 |
| 3.5 小结 | 第102-103页 |
| 第四章 嗜热纤维二糖水解酶 CbCBH48A 的晶体结构解析 | 第103-113页 |
| 4.1 引言 | 第103页 |
| 4.2 CbCBH48A 的表达与纯化 | 第103-104页 |
| 4.3 CbCBH48A 晶体的制备和衍射数据的收集与处理 | 第104-105页 |
| 4.4 CbCBH48A 结构模型的搭建和质量评估 | 第105-106页 |
| 4.5 CbCBH48A 及其酶-底物复合物晶体结构的分析 | 第106-111页 |
| 4.5.1 CbCBH48A 的整体结构 | 第106-107页 |
| 4.5.2 CbCBH48A 复合物的结构 | 第107-108页 |
| 4.5.3 CbCBH48A 与同家族成员的结构比较 | 第108-111页 |
| 4.6 小结 | 第111-113页 |
| 第五章 嗜热内酯酶 GkaP 底物特异性调控的结构基础 | 第113-121页 |
| 5.1 引言 | 第113页 |
| 5.2 GkaP 和突变体 Y99L 的底物特异性分析 | 第113-114页 |
| 5.3 GkaP 和突变体 Y99L 的表达与纯化 | 第114-115页 |
| 5.4 GkaP 和突变体 Y99L 晶体的制备和衍射数据的收集与处理 | 第115-116页 |
| 5.5 GkaP 和突变体 Y99L 结构模型的的搭建和质量评估 | 第116-117页 |
| 5.6 99 位点氨基酸影响 GkaP 底物特异性的结构基础 | 第117-119页 |
| 5.7 小结 | 第119-121页 |
| 第六章 脂肪酶 CalB 热动力学稳定性调控的结构基础 | 第121-129页 |
| 6.1 引言 | 第121页 |
| 6.2 CalB 和突变体 D223G/L278M 的热稳定性研究 | 第121-122页 |
| 6.3 CalB 及其突变体的表达与纯化 | 第122-123页 |
| 6.4 CalB 及其突变体晶体的制备和衍射数据的收集与处理 | 第123页 |
| 6.5 CalB 及其突变体结构模型的的搭建和质量评估 | 第123-125页 |
| 6.6 CalB 活性中心的刚性与酶的动力学稳定性 | 第125-127页 |
| 6.7 小结 | 第127-129页 |
| 附录Ⅰ | 第129-130页 |
| 附录Ⅱ | 第130-131页 |
| 附录Ⅲ | 第131-132页 |
| 附录Ⅳ | 第132-133页 |
| 创新点 | 第133-135页 |
| 展望 | 第135-137页 |
| 作者简介 | 第137页 |
| 攻读博士期间取得的科研成果 | 第137-138页 |
| 参与的科研课题 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139-141页 |
| 参考文献 | 第141-152页 |
