| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 一、引言 | 第11-16页 |
| 1. UL41基因及其编码蛋白的特点 | 第11-12页 |
| 1.1 UL41基因的特点 | 第11页 |
| 1.2 UL41基因编码蛋白的特点 | 第11-12页 |
| 2. VHS蛋白的功能 | 第12-13页 |
| 3. VHS与其他蛋白的相互作用 | 第13-14页 |
| 3.1 VHS与VP16的相互作用 | 第13-14页 |
| 3.2 VHS与细胞内翻译起始因子的相互作用 | 第14页 |
| 4. UL41基因工程(缺失)疫苗 | 第14-15页 |
| 5. 展望 | 第15页 |
| 6. 选题目的及意义 | 第15-16页 |
| 二、试验研究 | 第16-50页 |
| 1. 材料 | 第16-19页 |
| 1.1 基因序列 | 第16页 |
| 1.2 生物信息学相关分析工具 | 第16页 |
| 1.3 毒株、菌株及载体 | 第16页 |
| 1.4 实验动物 | 第16-17页 |
| 1.5 主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.6 主要溶液的配制 | 第18-19页 |
| 1.6.1 细胞培养相关溶液 | 第18页 |
| 1.6.2 核酸电泳相关溶液 | 第18页 |
| 1.6.3 细菌培养相关溶液 | 第18页 |
| 1.6.4 SDS-PAGE电泳相关溶液 | 第18-19页 |
| 1.6.5 Western-blot试剂 | 第19页 |
| 1.7 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2. 方法 | 第19-30页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第19页 |
| 2.2 鸭瘟病毒UL41基因的克隆、表达和抗血清制备 | 第19-27页 |
| 2.2.1 DPV-CHv株基因组DNA的提取 | 第19-21页 |
| 2.2.2 PCR扩增UL41基因及产物鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 UL41基因T克隆及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 UL41基因重组表达质粒的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.5 表达质粒pET-32a(+)/UL41在大肠杆菌BL21(DE3)中表达 | 第24-25页 |
| 2.2.6 重组UL41编码蛋白表达条件的优化 | 第25页 |
| 2.2.7 UL41重组蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.8 UL41表达蛋白的Western-blot鉴定 | 第26页 |
| 2.2.9 兔抗UL41重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.10 兔抗DPV UL41 IgG的粗提和鉴定 | 第27页 |
| 2.3 鸭瘟病毒UL41基因转录时相分析 | 第27-29页 |
| 2.3.1 FQ-PCR检测DPV感染DEF后UL41基因的转录 | 第27-29页 |
| 2.3.2 核酸蛋白合成抑制试验分析UL41基因类型 | 第29页 |
| 2.4 间接免疫荧光法动态检测UL41编码蛋白的亚细胞定位 | 第29-30页 |
| 3. 结果 | 第30-45页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第30-36页 |
| 3.1.1 DPV UL41基因的核苷酸序列分析 | 第30-31页 |
| 3.1.2 UL41基因编码氨基酸翻译和蛋白质组分分析 | 第31页 |
| 3.1.3 氨基酸序列对比及系统进化分析 | 第31-32页 |
| 3.1.4 信号肽预测 | 第32-33页 |
| 3.1.5 跨膜区域的预测 | 第33页 |
| 3.1.6 疏水性分析 | 第33页 |
| 3.1.7 抗原性分析 | 第33-34页 |
| 3.1.8 磷酸化位点预测 | 第34页 |
| 3.1.9 蛋白质二级结构预测 | 第34页 |
| 3.1.10 细胞亚定位分析 | 第34-35页 |
| 3.1.11 蛋白质三级结构预测 | 第35页 |
| 3.1.12 保守结构域CDD分析 | 第35页 |
| 3.1.13 稀有密码子分析结果 | 第35-36页 |
| 3.2 鸭瘟病毒UL41基因的克隆、表达和抗血清制备 | 第36-40页 |
| 3.2.1 鸭瘟病毒UL41基因的扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.2 鸭瘟病毒UL41基因的T克隆与鉴定 | 第37页 |
| 3.2.3 UL41基因重组表达质粒的构建 | 第37页 |
| 3.2.4 UL41重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第37-39页 |
| 3.2.5 重组蛋白纯化 | 第39页 |
| 3.2.6 UL41重组蛋白的Western-blot | 第39页 |
| 3.2.7 兔抗DPV UL41血清抗体效价的琼扩试验 | 第39页 |
| 3.2.8 Western-Blotting鉴定兔抗UL41多克隆抗体特异性 | 第39-40页 |
| 3.2.9 兔抗DPV UL41 IgG的粗提 | 第40页 |
| 3.3 鸭瘟病毒UL41基因转录时相分析 | 第40-44页 |
| 3.3.1 RNA完整性及纯度检测 | 第40页 |
| 3.3.2 引物特异性检测 | 第40-41页 |
| 3.3.3 绘制实时荧光定量PCR标准曲线 | 第41-42页 |
| 3.3.4 DPV感染DEF后UL41基因转录情况 | 第42-43页 |
| 3.3.5 数据分析 | 第43页 |
| 3.3.6 核酸蛋白合成抑制实验 | 第43-44页 |
| 3.4 间接免疫荧光法动态检测UL41编码蛋白的亚细胞定位 | 第44-45页 |
| 4. 讨论 | 第45-50页 |
| 4.1 生物信息学 | 第45-46页 |
| 4.1.1 关于生物信息学 | 第45页 |
| 4.1.2 鸭瘟病毒UL41基因及其编码蛋白特征分析 | 第45-46页 |
| 4.2 鸭瘟病毒UL41基因的克隆、表达和抗血清制备 | 第46-48页 |
| 4.2.1 UL41基因引物设计及T克隆 | 第46页 |
| 4.2.2 外源基因的融合表达 | 第46-47页 |
| 4.2.3 UL41抗血清的制备 | 第47-48页 |
| 4.3 鸭瘟病毒UL41基因转录时相分析 | 第48-49页 |
| 4.3.1 实时荧光定量PCR法检测DPV UL41基因转录情况 | 第48页 |
| 4.3.2 核酸蛋白合成抑制试验分析UL41基因类型 | 第48-49页 |
| 4.4 DPV体外感染DEF UL41蛋白的亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 三、结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第59页 |
