| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 胸膜肺炎放线杆菌概述 | 第13-19页 |
| 1.1 胸膜肺炎放线杆菌的病原学 | 第13-14页 |
| 1.2 胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 Apx毒素 | 第14-16页 |
| 1.2.2 其他毒力因子 | 第16-17页 |
| 1.3 病原的分离鉴定及诊断 | 第17-18页 |
| 1.4 猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展 | 第18-19页 |
| 2 体内诱导抗原技术(IVIAT)简介 | 第19-23页 |
| 2.1 IVIAT的基本原理与实验流程 | 第19-21页 |
| 2.1.1 血清的收集与处理 | 第20页 |
| 2.1.2 构建基因组文库 | 第20页 |
| 2.1.3 体内诱导表达基因的筛选 | 第20-21页 |
| 2.2 IVIAT的应用 | 第21-23页 |
| 2.2.1 IVIAT技术的优缺点 | 第22-23页 |
| 3 研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 研究部分 | 第24-57页 |
| 第一章 胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定 | 第24-34页 |
| 1. 材料 | 第24页 |
| 1.1 标准菌株和血清 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂和培养基 | 第24页 |
| 1.3 分离病料 | 第24页 |
| 1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-27页 |
| 2.1 细菌的分离培养 | 第24页 |
| 2.2 分离菌的病原特性观察 | 第24-25页 |
| 2.3 分离菌的生化试验鉴定 | 第25页 |
| 2.4 分离菌的PCR鉴定 | 第25-26页 |
| 2.5 细菌血清型鉴定 | 第26页 |
| 2.6 细菌的药敏试验 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| 3.1 细菌分离结果 | 第27-28页 |
| 3.2 细菌培养特性 | 第28页 |
| 3.3 细菌的生化特点 | 第28-29页 |
| 3.4 细菌的PCR鉴定结果 | 第29-30页 |
| 3.5 细菌的血清实验结果 | 第30页 |
| 3.6 细菌的药敏试验结果 | 第30-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-34页 |
| 4.1 胸膜肺炎放线杆菌的分离 | 第31-32页 |
| 4.2 APP的鉴定 | 第32页 |
| 4.3 血清分型与药敏试验 | 第32-33页 |
| 4.4 APP分离鉴定的意义 | 第33-34页 |
| 第二章 APP血清7型菌株基因表达文库的构建 | 第34-47页 |
| 1. 材料 | 第34-35页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-41页 |
| 2.1 APP血清7型菌株的活化 | 第35页 |
| 2.2 APP7型菌株基因组提取 | 第35页 |
| 2.3 APP7基因组酶切 | 第35-36页 |
| 2.3.1 APP基因组酶切的酶量优化 | 第35页 |
| 2.3.2 APP基因组DNA片段的回收 | 第35-36页 |
| 2.4 构建文库使用载体的制备 | 第36-37页 |
| 2.4.1 质粒pET28 a/b/c提取 | 第36页 |
| 2.4.2 质粒pET28 a/b/c的BamHI的酶切及去磷酸化 | 第36-37页 |
| 2.5 DH5a电转化感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.6 酶切片段与载体连接 | 第38-39页 |
| 2.6.1 酶切片段与载体连接体系的优化 | 第38页 |
| 2.6.2 连接 | 第38页 |
| 2.6.3 连接产物的电转化 | 第38-39页 |
| 2.7 再转化 | 第39-40页 |
| 2.8 表达文库的PCR鉴定 | 第40页 |
| 2.8.1 pET28系列通用引物设计 | 第40页 |
| 2.8.2 重组质粒的PCR鉴定及插入率估算 | 第40页 |
| 2.9 表达文库的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-43页 |
| 3.1 APP7基因组酶切优化结果 | 第41页 |
| 3.2 APP7基因组酶大量酶切结果 | 第41页 |
| 3.3 质粒pET28 a/b/c的提取与单酶切去磷酸化结果 | 第41-42页 |
| 3.4 连接体系优化结果 | 第42页 |
| 3.5 基因表达文库的PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.6 基因表达文库的双酶切鉴定结果 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| 4.1 基因组的提取与部分酶切 | 第44页 |
| 4.2 质粒pET28-a/b/c质粒的处理 | 第44页 |
| 4.3 基因组与表达载体的连接 | 第44-45页 |
| 4.4 文库的构建 | 第45-47页 |
| 第三章 胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原基因的筛选 | 第47-57页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| 1.1 菌株、血清及实验动物 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-52页 |
| 2.1 康复血清的制备及效价测定 | 第48页 |
| 2.2 血清吸附 | 第48-50页 |
| 2.2.1 全细胞吸附 | 第48-49页 |
| 2.2.2 细胞裂解物及热变性裂解物吸附 | 第49页 |
| 2.2.3 血清的吸附效果检测 | 第49-50页 |
| 2.3 基因组文库的筛选 | 第50-52页 |
| 3 结果 | 第52-54页 |
| 3.1 康复血清的制备结果 | 第52页 |
| 3.2 康复血清的吸附效果 | 第52-53页 |
| 3.3 APP血清7型体内诱导表达抗原的筛选 | 第53-54页 |
| 3.4 阳性克隆测序结果 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| 4.1 IVIAT在胸膜肺炎放线杆菌上的应用 | 第55页 |
| 4.2 FTs A基因 | 第55-56页 |
| 4.3 Fts K基因 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |