| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 大麦概述 | 第12页 |
| 2 黄酮概述 | 第12-17页 |
| 2.1 结构与分类 | 第12-14页 |
| 2.2 功能作用概述 | 第14-16页 |
| 2.2.1 植物生理功能 | 第14-15页 |
| 2.2.2 抗氧化功能 | 第15页 |
| 2.2.3 抗癌和抗肿瘤功能 | 第15-16页 |
| 2.3 合成代谢途径 | 第16-17页 |
| 3 肉桂酸-4-羟化酶(C4H,cinnamate-4-hydroxylase)概述 | 第17-19页 |
| 3.1 结构与催化功能 | 第17-18页 |
| 3.2 克隆与表达研究进展 | 第18-19页 |
| 4 技术手段与实验目的 | 第19-24页 |
| 4.1 技术手段 | 第19-23页 |
| 4.1.1 cDNA末端快速扩增技术 | 第19-20页 |
| 4.1.2 实时荧光定量PCR技术 | 第20-22页 |
| 4.1.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 4.2 目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 青稞C4H基因保守片段克隆及分析 | 第24-33页 |
| 1 材料与方法 | 第24-29页 |
| 1.1 材料 | 第24页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第24页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第24页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-29页 |
| 1.2.1 RNA提取 | 第24-26页 |
| 1.2.2 第一链cDNA合成 | 第26页 |
| 1.2.3 同源克隆 | 第26-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-31页 |
| 2.1 RNA完整性和纯度检测 | 第29-30页 |
| 2.2 同源克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.1 PCR扩增产物 | 第30页 |
| 2.2.2 保守片段序列测定及分析 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 3.1 RNA的提取 | 第31-32页 |
| 3.2 同源克隆 | 第32-33页 |
| 第三章 青稞C4H基因cDNA全长克隆及分析 | 第33-52页 |
| 1 材料与方法 | 第33-39页 |
| 1.1 材料 | 第33页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第33页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第33页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第33页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-39页 |
| 1.2.1 RNA提取 | 第33页 |
| 1.2.2 基因特异引物设计 | 第33-34页 |
| 1.2.3 cDNA 3端快速扩增(3'RACE) | 第34-36页 |
| 1.2.4 cDNA 5端快速扩增(5'RACE) | 第36-38页 |
| 1.2.5 目的片段的回收、连接、转化及阳性克隆的筛选和鉴定 | 第38-39页 |
| 1.2.6 拼接全长cDNA | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-48页 |
| 2.1 HvC4H基因cDNA全长 | 第39-40页 |
| 2.2 生物信息学分析 | 第40-48页 |
| 2.2.1 核苷酸序列分析 | 第40-41页 |
| 2.2.2 氨基酸序列分析 | 第41-44页 |
| 2.2.3 HvC4H蛋白一二级结构分析 | 第44-47页 |
| 2.2.4 HvC4H蛋白三级结构分析 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-52页 |
| 3.1 RACE操作 | 第48-50页 |
| 3.2 物信息学分析 | 第50-52页 |
| 第四章 青稞C4H基因在胚乳发育期的表达分析 | 第52-62页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| 1.1 材料 | 第52页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第52页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 1.2 方法 | 第52-54页 |
| 1.2.1 样品采集及处理 | 第52页 |
| 1.2.2 RNA的提取 | 第52页 |
| 1.2.3 第一链cDNA合成 | 第52页 |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR(RTF-qPCR) | 第52-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-58页 |
| 2.1 RNA完整性和纯度检测 | 第54-55页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR(RTF-qPCR) | 第55-58页 |
| 2.2.1 融解曲线分析 | 第55-57页 |
| 2.2.2 HvC4H相对定量表达分析 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-62页 |
| 3.1 实时荧光定量PCR技术 | 第58-60页 |
| 3.1.1 实验准备 | 第58-59页 |
| 3.1.2 检测方法选择 | 第59页 |
| 3.1.3 引物设计的原则 | 第59-60页 |
| 3.1.4 数据分析方法 | 第60页 |
| 3.2 HvC4H基因的表达情况 | 第60-62页 |
| 第五章 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第72页 |
