| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 符号及英文缩略表 | 第14-16页 |
| 文献综述 | 第16-25页 |
| 1.禽致病性大肠杆菌概述 | 第16-20页 |
| 2.T3SS 基本概况 | 第20-22页 |
| 3.ETT2 基本概况 | 第22-25页 |
| 引言 | 第25-26页 |
| 1 材料和方法 | 第26-45页 |
| 1.1 试验材料 | 第26-28页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 1.1.2 主要试验试剂 | 第26页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 1.1.4 培养基及试剂配制 | 第27-28页 |
| 1.2 ETT2在APEC中的亚型分析及流行病学调查 | 第28-32页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第28-30页 |
| 1.2.2 细菌DNA的提取 | 第30-31页 |
| 1.2.3 PCR检测ETT2 | 第31-32页 |
| 1.2.4 血清型鉴定 | 第32页 |
| 1.2.5 大肠杆菌系统进化群分析 | 第32页 |
| 1.3 ETT2毒力岛组分EivC克隆表达及其ATPase活性分析 | 第32-37页 |
| 1.3.1 序列分析 | 第32页 |
| 1.3.2 克隆表达及点突变引物设计 | 第32-33页 |
| 1.3.3 eivC的克隆 | 第33页 |
| 1.3.4 PCR产物与表达载体的双酶切 | 第33-34页 |
| 1.3.5 酶切产物的连接 | 第34页 |
| 1.3.6 连接产物的热激转化 | 第34页 |
| 1.3.7 重组表达质粒的提取与鉴定 | 第34-35页 |
| 1.3.8 eivC点突变片段及重组表达载体构建 | 第35页 |
| 1.3.9 重组融合蛋白表达 | 第35-36页 |
| 1.3.10 融合蛋白的可溶性分析 | 第36页 |
| 1.3.11 融合蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 1.3.12 ATPase活性测定 | 第37页 |
| 1.4 禽致病性大肠杆菌APCE94 eivC基因缺失株、互补株的构建及特性分析 | 第37-45页 |
| 1.4.1 基因缺失、鉴定及互补引物设计 | 第37-38页 |
| 1.4.2 APCE94电转化感受态的制备 | 第38页 |
| 1.4.3 APCE94-pKD46的构建 | 第38页 |
| 1.4.4 线性打靶DNA的制备 | 第38-39页 |
| 1.4.5 APCE94-pKD46电转化感受态制备 | 第39页 |
| 1.4.6 基因缺失株APCE94ΔeivC-Cm的构建 | 第39页 |
| 1.4.7 pKD46质粒的去除 | 第39-40页 |
| 1.4.8 APCE94ΔeivC-Cm电转化感受态细胞制备 | 第40页 |
| 1.4.9 抗性基因的去除 | 第40页 |
| 1.4.10 互补质粒pSTV28-eivC的构建 | 第40-41页 |
| 1.4.11 互补株APCE94CΔeivC的构建 | 第41页 |
| 1.4.12 生长曲线和运动性测定 | 第41页 |
| 1.4.13 透射电子显微镜（TEM） | 第41页 |
| 1.4.14 血清杀菌试验 | 第41页 |
| 1.4.15 细菌黏附和侵袭试验 | 第41-42页 |
| 1.4.16 胞内存活试验 | 第42页 |
| 1.4.17 荧光定量检测鞭毛、菌毛和毒力基因表达量 | 第42-44页 |
| 1.4.18 细胞因子检测 | 第44页 |
| 1.4.19 致病性测定 | 第44页 |
| 1.4.20 体内载菌量测定 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-61页 |
| 2.1 ETT2在APEC中的亚型分析及流行病学调查 | 第45-46页 |
| 2.1.1 ETT2亚型和分布特征 | 第45页 |
| 2.1.2 ETT2在APEC不同血清型中的分布 | 第45页 |
| 2.1.3 大肠杆菌进化分群结果 | 第45-46页 |
| 2.1.4 与Ⅲ型分泌系统相关的eip基因簇 | 第46页 |
| 2.2 ETT2毒力岛组分EivC克隆表达及其ATPase活性分析 | 第46-50页 |
| 2.2.1 APCE94 ETT2序列分析 | 第46-47页 |
| 2.2.2 重组表达载体的构建与鉴定 | 第47-48页 |
| 2.2.3 融合蛋白的表达与纯化 | 第48-49页 |
| 2.2.4 ATPase酶活测定 | 第49-50页 |
| 2.3 禽致病性大肠杆菌APCE94 eivC基因缺失株、互补株的构建及特性分析 | 第50-61页 |
| 2.3.1 线性打靶片段扩增 | 第50页 |
| 2.3.2 eivC基因缺失株的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3.3 eivC基因互补株的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| 2.3.4 生长曲线及运动性 | 第52页 |
| 2.3.5 透射电子显微镜（TEM） | 第52-53页 |
| 2.3.6 血清杀菌测定 | 第53-54页 |
| 2.3.7 细胞黏附及侵袭试验结果 | 第54-55页 |
| 2.3.8 胞内存活试验 | 第55-56页 |
| 2.3.9 荧光定量检测鞭毛、菌毛和毒力基因表达水平结果 | 第56-57页 |
| 2.3.10 细胞因子表达水平检测 | 第57-58页 |
| 2.3.11 致病性测定 | 第58-59页 |
| 2.3.12 体内载菌量测定 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-65页 |
| 3.1 ETT2在APEC中的亚型分析及流行病学调查 | 第61-62页 |
| 3.2 ETT2毒力岛组分EivC克隆表达及其ATPase活性分析 | 第62-63页 |
| 3.3 禽致病性大肠杆菌APCE94 eivC基因缺失株、互补株的构建及特性分析 | 第63-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 个人简介 | 第77页 |
| 硕士期间发表文章 | 第77页 |
