| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写和符号清单 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 1 材料与方法 | 第21-30页 |
| 1.1 材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 毒株及血清 | 第21页 |
| 1.1.2 细胞及疫苗 | 第21页 |
| 1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第21-22页 |
| 1.1.4 试验动物 | 第22页 |
| 1.1.5 主要仪器设备 | 第22页 |
| 1.1.6 主要溶液的配制 | 第22-24页 |
| 1.2 方法 | 第24-30页 |
| 1.2.1 病毒的培养 | 第24页 |
| 1.2.2 ELD50测定 | 第24页 |
| 1.2.3 动物回归试验 | 第24页 |
| 1.2.4 引物的设计 | 第24-25页 |
| 1.2.5 病毒的检测 | 第25页 |
| 1.2.6 新型鸭细小病毒DS-15 株VP3基因的克隆与序列分析 | 第25页 |
| 1.2.7 重组VP3表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| 1.2.8 重组表达质粒的鉴定 | 第26页 |
| 1.2.9 重组蛋白的表达分析 | 第26-27页 |
| 1.2.10 重组VP3蛋白的纯化 | 第27页 |
| 1.2.11 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第27-28页 |
| 1.2.12 基于VP3蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第28页 |
| 1.2.13 抗原包被浓度和阴/阳性血清稀释度的确定 | 第28页 |
| 1.2.14 酶标二抗工作浓度的确定 | 第28页 |
| 1.2.15 包被条件的确定 | 第28页 |
| 1.2.16 封条件的确定 | 第28-29页 |
| 1.2.17 血清及酶标二抗孵育时间的优化 | 第29页 |
| 1.2.18 显色时间的确定 | 第29页 |
| 1.2.19 阴阳性临界值的确定 | 第29页 |
| 1.2.20 重复性试验及敏感性试验 | 第29页 |
| 1.2.21 样品检测 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-43页 |
| 2.1 新型鸭细小病毒DA15株的生物学特性 | 第30-34页 |
| 2.1.1 新型鸭细小病毒DA15株的培养特性 | 第30-31页 |
| 2.1.2 ELD50测定 | 第31页 |
| 2.1.3 动物回归试验结果 | 第31-32页 |
| 2.1.4 病毒的检测 | 第32页 |
| 2.1.5 VP3同源性分析 | 第32-34页 |
| 2.1.6 系统发生数分析 | 第34页 |
| 2.2 VP3基因的克隆与表达 | 第34-36页 |
| 2.2.1 VP3重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.2 重组VP3蛋白的诱导表达及纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.3 Western-blot鉴定 | 第36页 |
| 2.3 基于VP3蛋白的间接ELISA方法的建立 | 第36-43页 |
| 2.3.1 抗原蛋白包被浓度及血清稀释度的确定 | 第36-37页 |
| 2.3.2 酶标二抗稀释度的优化 | 第37页 |
| 2.3.3 包被条件的确定 | 第37-38页 |
| 2.3.4 封闭条件的优化 | 第38页 |
| 2.3.5 血清孵育时间及酶标二抗孵育时间确定 | 第38-39页 |
| 2.3.6 显色时间的优化 | 第39页 |
| 2.3.7 阴阳性临界值的确定 | 第39页 |
| 2.3.8 重复性及敏感性试验 | 第39-40页 |
| 2.3.9 特异性试验 | 第40-41页 |
| 2.3.10 检测方法应用 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第52页 |
