| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表（ABBREVIATION） | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 PRRSV的危害 | 第12页 |
| 1.1.2 PRRSV的分子生物学特征 | 第12-13页 |
| 1.1.3 nsp4蛋白简介 | 第13页 |
| 1.2 抗病毒免疫相关的信号通路 | 第13-18页 |
| 1.2.1 Toll样受体（TLRs）信号通路 | 第14-15页 |
| 1.2.2 RIG-I信号通路（RLRs） | 第15-16页 |
| 1.2.3 JAK-STAT信号通路 | 第16-18页 |
| 1.3 3C样蛋白酶调控天然免疫 | 第18页 |
| 1.4 PRRSV调控天然免疫 | 第18-20页 |
| 1.4.1 PRRSV抑制干扰素的产生 | 第19页 |
| 1.4.2 PRRSV拮抗JAK-STAT信号通路 | 第19-20页 |
| 2 目的与意义 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-33页 |
| 3.1 试验材料 | 第21-24页 |
| 3.1.1 细胞、毒株和菌株 | 第21页 |
| 3.1.2 构建质粒所需材料 | 第21页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂 | 第21-22页 |
| 3.1.4 Western Blot实验所需材料 | 第22页 |
| 3.1.5 培养基及相关试剂配制 | 第22-23页 |
| 3.1.6 主要缓冲液和试剂及其配制 | 第23-24页 |
| 3.1.7 主要实验仪器及设备 | 第24页 |
| 3.1.8 分子生物学分析软件 | 第24页 |
| 3.2 试验方法 | 第24-33页 |
| 3.2.1 细胞总RNA提取、反转录及实时荧光定量PCR | 第24-27页 |
| 3.2.2 JAK-STAT信号通路5个接头分子真核表达质粒构建 | 第27页 |
| 3.2.3 STAT2突变体真核表达质粒构建 | 第27页 |
| 3.2.4 限制性内切酶酶切反应 | 第27页 |
| 3.2.5 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第27-28页 |
| 3.2.6 PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第28页 |
| 3.2.7 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第28-29页 |
| 3.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第29页 |
| 3.2.9 连接产物的转化 | 第29页 |
| 3.2.10 重组质粒的制备与鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.11 PAMs细胞制备 | 第30页 |
| 3.2.12 质粒转染（脂质体介导转染法） | 第30-31页 |
| 3.2.13 双荧光素酶报告基因实验 | 第31页 |
| 3.2.14 Western Blot样品制备 | 第31页 |
| 3.2.15 Co-IP样品制备 | 第31-32页 |
| 3.2.16 统计学方法 | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-45页 |
| 4.1 PRRSV抑制IFN-α诱导的ISGs的表达 | 第33-34页 |
| 4.2 筛选抑制IFN-α诱导的ISRE启动子活性的蛋白 | 第34-35页 |
| 4.3 PRRSV nsp4蛋白抑制IFN- 诱导的ISRE启动子活性 | 第35-36页 |
| 4.4 nsp4蛋白抑制IFN-α诱导的ISRE启动子活性依赖其丝氨酸蛋白酶活性 | 第36-37页 |
| 4.5 nsp4蛋白切割STAT2 | 第37-40页 |
| 4.5.1 构建JAK-STAT信号通路重要信号分子真核表达质粒 | 第37-38页 |
| 4.5.2 超表达nsp4切割STAT2 | 第38-39页 |
| 4.5.3 nsp4蛋白丝氨酸蛋白酶活性影响其切割活性 | 第39-40页 |
| 4.5.4 PRRSV感染降解STAT2 | 第40页 |
| 4.6 nsp4蛋白切割STAT2位点的研究 | 第40-41页 |
| 4.7 nsp4蛋白切割STAT2对JAK-STAT信号通路的影响 | 第41-45页 |
| 4.7.1 nsp4蛋白切割STAT2影响STAT1与STAT2的互作 | 第41-42页 |
| 4.7.2 STAT2蛋白被nsp4切割之后，ISRE启动子活性被抑制 | 第42-43页 |
| 4.7.3 STAT2蛋白被nsp4切割之后，ISRE诱导的ISGs被抑制 | 第43-45页 |
| 5 讨论 | 第45-49页 |
| 5.1 PRRSV抑制IFN-α诱导的ISGs的表达 | 第45页 |
| 5.2 PRRSV编码的nsp4蛋白抑制IFN-α诱导的ISRE活性的研究 | 第45-46页 |
| 5.3 PRRSV编码的nsp4蛋白切割STAT2蛋白 | 第46-47页 |
| 5.4 PRRSV编码的nsp4蛋白切割STAT2位点的鉴定 | 第47页 |
| 5.5 PRRSV编码的nsp4蛋白切割STAT2的影响 | 第47-49页 |
| 6 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
