| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-15页 |
| English catalog | 第15-21页 |
| 1 绪论 | 第21-34页 |
| ·漆酶及其来源 | 第21-23页 |
| ·漆酶的定义 | 第21页 |
| ·漆酶的来源 | 第21-23页 |
| ·漆酶的性质 | 第23-24页 |
| ·漆酶的分子量 | 第23页 |
| ·漆酶的等电点、最适反应温度与pH值 | 第23页 |
| ·影响漆酶活性的因素 | 第23-24页 |
| ·漆酶的结构与催化机理 | 第24-27页 |
| ·漆酶的活性中心 | 第24页 |
| ·漆酶的高级结构 | 第24-25页 |
| ·漆酶的催化机理 | 第25-27页 |
| ·微生物漆酶的合成与诱导 | 第27页 |
| ·漆酶的合成位置 | 第27页 |
| ·漆酶的诱导 | 第27页 |
| ·漆酶的分子生物学研究 | 第27-28页 |
| ·漆酶的氨基酸序列 | 第27页 |
| ·漆酶基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·漆酶基因的表达 | 第28页 |
| ·漆酶的应用 | 第28-29页 |
| ·木质素降解 | 第28-29页 |
| ·环境修复 | 第29页 |
| ·染料脱色与解毒 | 第29页 |
| ·其他应用 | 第29页 |
| ·漆酶的电化学研究 | 第29-32页 |
| ·漆酶的生物电催化 | 第30页 |
| ·漆酶修饰电极 | 第30-32页 |
| ·漆酶在电化学领域的应用 | 第32页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第32-34页 |
| 2 产漆酶真菌的分离与鉴定 | 第34-44页 |
| ·实验材料 | 第34-37页 |
| ·采样地概况 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·土壤样品采集 | 第37页 |
| ·产漆酶真菌的富集与分离 | 第37页 |
| ·产酶菌株的筛选 | 第37页 |
| ·漆酶活力测定 | 第37页 |
| ·显微形态观察 | 第37-38页 |
| ·rDNA-ITS序列分析 | 第38-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·土壤样品采集 | 第40页 |
| ·漆酶高产真菌的分离与筛选 | 第40-41页 |
| ·形态学鉴定 | 第41-42页 |
| ·rDNA-ITS序列扩增与分析 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 3 M.verrucaria NF-05产漆酶条件研究 | 第44-66页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要软件 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·种子液的制备 | 第45页 |
| ·蛋白含量测定 | 第45页 |
| ·菌体生长量测定 | 第45页 |
| ·菌株生长及产酶进程的初步研究 | 第45页 |
| ·碳、氮源对菌株产酶的影响 | 第45-46页 |
| ·培养基初始pH值对菌株产酶的影响 | 第46页 |
| ·装液量及接种量对菌株产酶的影响 | 第46页 |
| ·培养温度对菌株产酶的影响 | 第46页 |
| ·摇床转速对菌株产酶的影响 | 第46页 |
| ·金属离子对菌株产酶的影响 | 第46页 |
| ·常规漆酶底物对菌株产酶的影响 | 第46页 |
| ·响应面法优化菌株产酶条件 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-63页 |
| ·蛋白测定标准曲线 | 第47页 |
| ·M.verrucaria NF-05产酶及生长进程 | 第47-48页 |
| ·碳、氮源对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第48-52页 |
| ·培养基初始pH值对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第52-53页 |
| ·装液量对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第53页 |
| ·接种量对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第53-54页 |
| ·培养温度对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第54-55页 |
| ·摇床转速对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第55-56页 |
| ·金属离子对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第56-57页 |
| ·常规漆酶底物对Mverrucaria NF-05产酶的影响 | 第57-58页 |
| ·PB试验 | 第58-60页 |
| ·最陡爬坡试验 | 第60页 |
| ·中心组合试验 | 第60-63页 |
| ·验证试验 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 4 M.verrucaria NF-05胞外漆酶的诱导 | 第66-76页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·诱导物 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-69页 |
| ·铜离子对菌株产酶的诱导 | 第66-67页 |
| ·酚胺类物质对菌株产酶的诱导 | 第67页 |
| ·其他诱导物对菌株产酶的诱导 | 第67页 |
| ·合成染料对菌株产酶的诱导 | 第67-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-73页 |
| ·铜离子对菌株产酶的诱导 | 第69-71页 |
| ·酚类物质对菌株产酶的诱导 | 第71页 |
| ·胺类物质对菌株产酶的诱导 | 第71-72页 |
| ·其他底物对菌株产酶的诱导 | 第72页 |
| ·合成染料对菌株产酶的诱导 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 5 Mverrucaria NF-05 漆酶的纯化及其生化、光谱学和酶学性质 | 第76-93页 |
| ·实验材料 | 第76-77页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·主要试剂及缓冲液 | 第76-77页 |
| ·实验方法 | 第77-80页 |
| ·粗酶液的制备 | 第77页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第77页 |
| ·蛋白纯化缓冲体系的确定 | 第77页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析 | 第77-78页 |
| ·SephadexG-75凝胶柱过滤层析 | 第78页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第78页 |
| ·活性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE) | 第78页 |
| ·N-端氨基酸序列测定 | 第78页 |
| ·肽段序列的飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS) | 第78-79页 |
| ·金属组分的原子发射光谱测定(ICP-AES) | 第79页 |
| ·光谱学特性 | 第79页 |
| ·不成对电子的顺磁共振效应检测(EPR) | 第79页 |
| ·最适反应温度及热稳定性 | 第79页 |
| ·最适反应pH值及pH稳定性 | 第79页 |
| ·金属离子对漆酶活性的影响 | 第79页 |
| ·有机溶剂对漆酶活性的影响 | 第79页 |
| ·抑制剂对漆酶活性的影响 | 第79-80页 |
| ·动力学参数测定 | 第80页 |
| ·结果与分析 | 第80-89页 |
| ·硫酸铵盐析饱和度 | 第80页 |
| ·蛋白洗脱缓冲体系的确定 | 第80-81页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第81页 |
| ·表观分子量 | 第81-82页 |
| ·N-端氨基酸序列测定 | 第82页 |
| ·肽段序列分析 | 第82-83页 |
| ·金属组分的测定 | 第83页 |
| ·光谱学特性 | 第83-84页 |
| ·不成对电子状态 | 第84-85页 |
| ·最适反应温度及热稳定性 | 第85页 |
| ·最适反应pH值及pH稳定性 | 第85-86页 |
| ·金属离子对漆酶活性的影响 | 第86-87页 |
| ·有机溶剂对漆酶活性的影响 | 第87页 |
| ·抑制剂对漆酶活性的影响 | 第87-88页 |
| ·漆酶在不同底物下的米氏常数 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-92页 |
| ·本章小结 | 第92-93页 |
| 6 M.verrucaria NF-05漆酶对合成染料的脱色及酚胺类物质的转化 | 第93-104页 |
| ·实验材料 | 第93-94页 |
| ·主要仪器 | 第93页 |
| ·主要试剂 | 第93-94页 |
| ·实验方法 | 第94-95页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶在不同介体下对合成染料的脱色试验 | 第94页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶对合成染料的降解 | 第94页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶与商品酶催化氧化酚胺类物质的比较 | 第94-95页 |
| ·结果与分析 | 第95-100页 |
| ·不同介体介导的M.verrucaria NF-05漆酶对合成染料脱色研究 | 第95-97页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶对合成染料的降解 | 第97-98页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶与商品酶对酚胺类物质转化的比较研究 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| ·本章小结 | 第102-104页 |
| 7 M.verrucaria NF-05漆酶电化学性质 | 第104-110页 |
| ·实验材料 | 第104-105页 |
| ·供试氧化还原蛋白 | 第104页 |
| ·电化学工作站 | 第104页 |
| ·电极 | 第104-105页 |
| ·实验方法 | 第105页 |
| ·氧化还原蛋白修饰工作电极的制备 | 第105页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶的直接电子转移(DET) | 第105页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶对过氧化氢的电催化还原 | 第105页 |
| ·结果与分析 | 第105-108页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶的直接电子转移 | 第105-107页 |
| ·M.verrucaria NF-05漆酶对过氧化氢的电催化还原 | 第107-108页 |
| ·讨论 | 第108-109页 |
| ·本章小结 | 第109-110页 |
| 结论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-125页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
