| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 引言 | 第12-17页 |
| 1.1 七鳃鳗在进化和发育生物学研究中的重要意义 | 第12页 |
| 1.2 七鳃鳗特有的适应性免疫分子 VLR 的生物学意义 | 第12页 |
| 1.3 VLR 与抗原识别 | 第12-13页 |
| 1.4 七鳃鳗补体研究现状 | 第13-16页 |
| 1.5 本论文所要解决的问题 | 第16-17页 |
| 第2章 七鳃鳗抗血清产生的细胞毒作用 | 第17-26页 |
| 2.1 材料和方法 | 第17-20页 |
| 2.1.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.1.1 动物 | 第17页 |
| 2.1.1.2 细胞及菌株 | 第17页 |
| 2.1.2 方法 | 第17-20页 |
| 2.1.2.1 七鳃鳗的免疫 | 第17页 |
| 2.1.2.2 七鳃鳗抗血清分离及收集 | 第17-18页 |
| 2.1.2.3 七鳃鳗抗血清对细胞抗原的凝集实验 | 第18-19页 |
| 2.1.2.4 七鳃鳗抗血清对细胞抗原的杀伤实验 | 第19-20页 |
| 2.1.2.5 电镜观察七鳃鳗抗血清对细胞抗原的杀伤 | 第20页 |
| 2.1.2.6 统计分析 | 第20页 |
| 2.2 结果 | 第20-24页 |
| 2.2.1 抗血清对细胞抗原的凝集作用 | 第20-21页 |
| 2.2.2 抗血清对细胞抗原的杀伤作用 | 第21-24页 |
| 2.2.2.1 七鳃鳗抗血清能够有效杀伤兔红细胞 | 第21页 |
| 2.2.2.2 免疫七鳃鳗血清能够有效杀伤大肠杆菌 | 第21-22页 |
| 2.2.2.3 七鳃鳗抗血清对各种细胞抗原的杀伤比较 | 第22-23页 |
| 2.2.2.4 七鳃鳗抗血清杀菌和溶血特性 | 第23-24页 |
| 2.3 小结 | 第24-26页 |
| 第3章 七鳃鳗抗血清产生的细胞毒作用与 VLR 相关 | 第26-30页 |
| 3.1 材料和方法 | 第26-27页 |
| 3.1.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.2 方法 | 第26-27页 |
| 3.1.2.1 Western blot 实验 | 第26页 |
| 3.1.2.2 七鳃鳗血清中抗原特异性 VLRB 的亲和纯化 | 第26-27页 |
| 3.1.2.3 免疫沉淀和七鳃鳗血清中 VLRB 的清除 | 第27页 |
| 3.1.2.4 七鳃鳗血清中 VLRB 清除后再次加回 | 第27页 |
| 3.2 结果 | 第27-29页 |
| 3.2.1 七鳃鳗血清中抗原特异性 VLRB 的亲和纯化 | 第27-28页 |
| 3.2.2 七鳃鳗血清中 VLRB 的清除 | 第28页 |
| 3.2.3 七鳃鳗血清中 VLRB 清除前后及加回对抗血清细胞毒作用的影响 | 第28-29页 |
| 3.3 小结 | 第29-30页 |
| 第4章 七鳃鳗抗血清产生的细胞毒作用与 C1Q 相关 | 第30-50页 |
| 4.1 材料和方法 | 第30-43页 |
| 4.1.1 材料 | 第30页 |
| 4.1.2 方法 | 第30-43页 |
| 4.1.2.1 C1q 基因的克隆、原核表达及重组蛋白纯化 | 第30-34页 |
| 4.1.2.2 抗 C1q 多克隆抗体的制备 | 第34-37页 |
| 4.1.2.3 抗 C1q 单克隆抗体的制备 | 第37-41页 |
| 4.1.2.4 免疫沉淀和七鳃鳗血清中 C1q 的清除 | 第41-42页 |
| 4.1.2.5 逆转录 PCR（RT-PCR）法分析 C1q mRNA 在七鳃鳗各组织中分布 | 第42-43页 |
| 4.2 结果 | 第43-48页 |
| 4.2.1 C1q 基因克隆及其表达载体的构建与鉴定 | 第43页 |
| 4.2.2 重组 C1q 的原核表达及 C1q 蛋白的纯化 | 第43-45页 |
| 4.2.3 纯化抗 C1q 抗体 SDS-PAGE 分析及 ELISA 检测 | 第45-47页 |
| 4.2.3.1 纯化抗 C1q 抗体 SDS-PAGE 分析 | 第45-46页 |
| 4.2.3.2 纯化抗 C1q 抗体 ELISA 检测 | 第46-47页 |
| 4.2.4 七鳃鳗血清 C1q 的免疫沉淀清除 | 第47页 |
| 4.2.5 抗血清的杀伤作用依赖于 C1q | 第47-48页 |
| 4.2.6 七鳃鳗 C1q mRNA 的组织分布 | 第48页 |
| 4.3 讨论 | 第48-49页 |
| 4.4 小结 | 第49-50页 |
| 第5章 七鳃鳗抗血清产生的细胞毒作用与 C3 相关 | 第50-62页 |
| 5.1 材料和方法 | 第50-57页 |
| 5.1.1 材料 | 第50页 |
| 5.1.2 方法 | 第50-57页 |
| 5.1.2.1 抗 C3 多克隆抗体制备 | 第50-56页 |
| 5.1.2.2 免疫沉淀和七鳃鳗血清中 C3 的清除 | 第56-57页 |
| 5.2 结果 | 第57-61页 |
| 5.2.1 C3 基因片段克隆及其表达载体的构建与鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2.2 重组 C3 的原核表达及 C3 蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 5.2.3 纯化抗 C3 抗体 SDS-PAGE 分析及 ELISA 检测 | 第59-60页 |
| 5.2.3.1 纯化抗 C3 抗体 SDS-PAGE 分析 | 第59-60页 |
| 5.2.3.2 纯化抗 C3 抗体 ELISA 检测 | 第60页 |
| 5.2.4 七鳃鳗血清 C3 的免疫沉淀清除 | 第60页 |
| 5.2.5 抗血清的杀伤作用依赖于 C3 | 第60-61页 |
| 5.3 小结 | 第61-62页 |
| 第6章 七鳃鳗抗血清产生的细胞毒作用机制初步研究 | 第62-67页 |
| 6.1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 6.1.1 材料 | 第62页 |
| 6.1.2 方法 | 第62-63页 |
| 6.1.2.1 免疫共沉淀 | 第62页 |
| 6.1.2.2 流式细胞分析 | 第62-63页 |
| 6.1.2.3 激光共聚焦显微镜分析 | 第63页 |
| 6.1.2.4 VLRB 与 C1q 相互作用对补体 C3 的激活 | 第63页 |
| 6.2 结果 | 第63-66页 |
| 6.2.1 VLRB 与 C1q 在七鳃鳗血清中相互作用免疫共沉淀分析 | 第63-64页 |
| 6.2.2 VLRB 与 C1q 在靶细胞表面相互作用 | 第64页 |
| 6.2.3 VLRB 与 C1q 在七鳃鳗血清中相互作用对补体 C3 的激活 | 第64-66页 |
| 6.3 小结 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 本论文的创新点 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 1 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第75-76页 |
| 附录 2 攻读博士学位期间所受奖励 | 第76页 |
| 附录 3 攻读博士学位期间申请专利 | 第76页 |
| 附录 4 攻读博士学位期间作为负责人主持的科研项目： | 第76页 |
| 附录 5 攻读博士学位期间参与科研项目： | 第76-77页 |
| 附录 7 获得奖励证书 | 第77-78页 |
| 附录 8 申请专利 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
