| 摘要 | 第2-3页 |
| ABSTRACT | 第3页 |
| 英文缩写对照表 | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| 1.1 狂犬病病原学 | 第9-12页 |
| 1.1.1 分类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 狂犬病病毒的基因结构特征 | 第10-12页 |
| 1.2 狂犬病病毒实验室检测方法 | 第12-13页 |
| 1.2.1 小鼠分离病毒试验(Mouse Isolation Test, MIT) | 第12页 |
| 1.2.2 细胞培养分离病毒技术(Cell-culture Isolation Technique, CIT) | 第12页 |
| 1.2.3 荧光抗体实验(Fluorescent Antibody Test, FAT) | 第12页 |
| 1.2.4 快速狂犬病酶免疫诊断法(Rapid Rabies Enzyme Immunodetection, RREID) | 第12-13页 |
| 1.3 狂犬病病毒抗体的实验室检测方法 | 第13-14页 |
| 1.3.1 小鼠病毒中和试验(mouse neutralization test, MNT) | 第13页 |
| 1.3.2 荧光抗体病毒中和试验(Fluorescent Antibody Virus Neutralization test, FAVN) | 第13页 |
| 1.3.3 快速荧光灶抑制试验(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test, RFFIT) | 第13页 |
| 1.3.4 酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA) | 第13-14页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-24页 |
| 2.1 材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 毒株与血清 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂及配制 | 第15-17页 |
| 2.1.2.1 工程菌的重新培养用试剂 | 第15页 |
| 2.1.2.2 蛋白纯化与鉴定用试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.2.3 间接ELISA用试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.2.4 FAVN用试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 2.2 方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 菌株的复苏与PCR验证 | 第17-18页 |
| 2.2.2 目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第18-20页 |
| 2.2.3 间接ELISA方法的建立 | 第20-24页 |
| 2.2.3.1 ELISA反应体系 | 第20-21页 |
| 2.2.3.2 封闭液的确定 | 第21页 |
| 2.2.3.3 血清稀释液的确定 | 第21页 |
| 2.2.3.4 最佳抗原浓度及最适血清浓度的选择 | 第21页 |
| 2.2.3.5 抗原包被条件的优化 | 第21-22页 |
| 2.2.3.6 血清孵育时间的优化 | 第22页 |
| 2.2.3.7 酶标抗体稀释度的优化 | 第22页 |
| 2.2.3.8 酶标抗体孵育时间的优化 | 第22页 |
| 2.2.3.9 重复性实验 | 第22页 |
| 2.2.3.10 敏感性实验 | 第22页 |
| 2.2.3.11 与进口ELISA试剂盒的比较 | 第22-23页 |
| 2.2.3.12 FAVN的比较 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-35页 |
| 3.1 菌株的鉴定 | 第24-25页 |
| 3.2 蛋白诱导与纯化 | 第25-27页 |
| 3.2.1 蛋白诱导表达的情况 | 第25页 |
| 3.2.2 纯化后目的蛋白条带的鉴定 | 第25-26页 |
| 3.2.3 蛋白浓度测定结果 | 第26-27页 |
| 3.3 狂犬病病毒中和抗体间接ELISA方法的优化 | 第27-35页 |
| 3.3.1 封闭液的选择 | 第27页 |
| 3.3.2 血清稀释液的优化 | 第27-28页 |
| 3.3.3 最佳抗原浓度和最适血清浓度的确定 | 第28页 |
| 3.3.4 抗原包被时间的优化 | 第28-29页 |
| 3.3.5 封闭时间的优化 | 第29页 |
| 3.3.6 血清孵育时间的优化 | 第29页 |
| 3.3.7 酶标二抗稀释度的确定 | 第29-30页 |
| 3.3.8 酶标二抗孵育时间的优化 | 第30页 |
| 3.3.9 标准曲线方程的建立 | 第30-31页 |
| 3.3.10 重复性实验结果 | 第31-32页 |
| 3.3.10.1 批内重复性实验结果及变异系数 | 第31-32页 |
| 3.3.10.2 批间重复性实验结果及变异系数 | 第32页 |
| 3.3.11 敏感性实验 | 第32-33页 |
| 3.3.12 与进口ELISA试剂盒的结果比较 | 第33页 |
| 3.3.13 与FAVN的结果比较 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 4.1 包被蛋白的选取 | 第35页 |
| 4.1.1 包被病毒与包被表达蛋白的比较 | 第35页 |
| 4.1.2 不同毒株G基因的选择 | 第35页 |
| 4.1.3 表达RV G3蛋白的工程菌的优势 | 第35页 |
| 4.2 浓缩纯化RV G3蛋白的注意事项 | 第35-36页 |
| 4.3 定量中和抗体的间接ELISA的注意事项 | 第36-38页 |
| 4.3.1 酶标板 | 第36页 |
| 4.3.2 封闭液和血清稀释液 | 第36页 |
| 4.3.3 包被 | 第36页 |
| 4.3.4 洗涤 | 第36-37页 |
| 4.3.5 显色 | 第37页 |
| 4.3.6 标准曲线 | 第37页 |
| 4.3.7 特异性 | 第37页 |
| 4.3.8 重复性 | 第37页 |
| 4.3.9 敏感性 | 第37页 |
| 4.3.10 与进口ELISA试剂盒的比较 | 第37页 |
| 4.3.11 与FAVN的比较 | 第37-38页 |
| 全文总结 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
