| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 一 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 LEA蛋白概述 | 第10-15页 |
| 1.1.1 LEA蛋白的性质及分类 | 第10-12页 |
| 1.1.2 LEA蛋白在抵抗重金属胁迫中的主要作用 | 第12-13页 |
| 1.1.3 LEA蛋白的无序结构特性 | 第13-14页 |
| 1.1.4 固有无序蛋白简介 | 第14-15页 |
| 1.2 大豆PM1蛋白的发现及其保护功能 | 第15页 |
| 1.3 蛋白质的多聚体现象简述 | 第15-16页 |
| 1.4 交联法在研究蛋白相互作用中的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 酿酒酵母△cup2的性质及应用 | 第17-18页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 二 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株、载体及抗体 | 第19-21页 |
| 2.1.3 主要设备与仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 主要试剂配制 | 第22-26页 |
| 2.2.1 主要培养基的配制 | 第22-24页 |
| 2.2.2 电泳及免疫印记相关试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 亲和层析蛋白纯化使用试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 方法 | 第26-35页 |
| 2.3.1 PM1蛋白序列分析 | 第26页 |
| 2.3.2 PM1蛋白及PM1-N和PM1-C短肽的表达纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.3 凝胶过滤层析法检测蛋白分子量 | 第27-28页 |
| 2.3.4 酵母重组载体的构建及转化 | 第28-30页 |
| 2.3.5 酵母及大豆胚根热稳定性蛋白的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.6 Brand ford法检测蛋白浓度 | 第31页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE法检测蛋白分子量 | 第31-32页 |
| 2.3.8 蛋白质免疫印迹方法 | 第32-33页 |
| 2.3.9 PM1蛋白及其短肽的交联反应 | 第33页 |
| 2.3.10 DEPC对PM1蛋白及PM1-C短肽组氨酸的修饰 | 第33页 |
| 2.3.11 固相金属螯合层析法检测Cu~(2+)与PM1蛋白和短肽的相互作 | 第33-34页 |
| 2.3.12 重组酵母对Cu~(2+)耐受性检测 | 第34-35页 |
| 三 结果 | 第35-54页 |
| 3.1 PM1蛋白序列特性 | 第35-37页 |
| 3.2 PM1蛋白及PM1-N和PM1-C短肽的表达及纯化 | 第37-38页 |
| 3.3 凝胶过滤层析法发现及鉴定PM1蛋白及其短肽形成的寡聚体 | 第38-41页 |
| 3.4 重组酵母载体构建及验证 | 第41-42页 |
| 3.5 PM1及PM1-C在酵母及大豆中具有寡聚体的存在形式 | 第42-46页 |
| 3.5.1 PM1蛋白三个抗体的设计 | 第42-43页 |
| 3.5.2 PM1蛋白三个抗体的特异性检测 | 第43页 |
| 3.5.3 酵母细胞内PM1蛋白及短肽的存在形式检测 | 第43-45页 |
| 3.5.4 大豆胚根内PM1蛋白存在形式的检测 | 第45-46页 |
| 3.6 PM1及C端短肽能在交联剂的作用下形成寡聚体 | 第46-47页 |
| 3.7 免疫印迹检测PM1蛋白及其短肽寡聚体 | 第47-49页 |
| 3.7.1 PM1蛋白单体、寡聚体及高分子量聚集物的Western检测 | 第47-48页 |
| 3.7.2 PM1-C短肽的单体及寡聚体的Western检测 | 第48-49页 |
| 3.8 组氨酸参与PM1蛋白及PM1-C短肽寡聚体形成 | 第49-51页 |
| 3.9 PM1和PM1-C中组氨酸与Cu~(2+)结合促进形成高分子量聚集物 | 第51-52页 |
| 3.10 PM1蛋白及其短肽可提高△cup2缺陷型酵母的耐Cu~(2+)能力 | 第52-54页 |
| 四 讨论 | 第54-57页 |
| 4.1 酵母和植物细胞中PM1寡聚体是真实存在的 | 第54-55页 |
| 4.2 PM1蛋白通过组氨酸结合金属离子保护细胞 | 第55页 |
| 4.3 PM1-C的组氨酸参与形成PM1的聚集及其可能的功能 | 第55-57页 |
| 五 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第67页 |
