| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-28页 |
| 1.1 香草醛概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 香草醛的性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 香草醛的用途 | 第12页 |
| 1.1.3 香草醛的市场情况 | 第12-13页 |
| 1.2 香草醛生产技术发展概况 | 第13-20页 |
| 1.2.1 植物提取法 | 第13-14页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第14-17页 |
| 1.2.3 生物技术法 | 第17-20页 |
| 1.3 酶蛋白的分子改造 | 第20-24页 |
| 1.3.1 酶的蛋白质工程 | 第20-21页 |
| 1.3.2 酶的分子改造方法 | 第21-24页 |
| 1.3.3 半理性设计饱和突变 | 第24页 |
| 1.4 酵母工程菌概况 | 第24-26页 |
| 1.4.1 酵母表达系统 | 第25-26页 |
| 1.5 本论文的研究意义和主要研究内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 本课题立题目的、意义 | 第26页 |
| 1.5.2 本课题的研究思路和研究内容 | 第26-28页 |
| 第2章 壳聚糖膜对异丁香酚单加氧酶转化异丁香酚生成香草醛影响的研究 | 第28-38页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第29页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 壳聚糖膜的制备 | 第30页 |
| 2.3.2 异丁香酚单加氧酶的诱导表达 | 第30-31页 |
| 2.3.3 样品处理 | 第31页 |
| 2.3.4 壳聚糖膜对异丁香酚单加氧酶转化异丁香酚生成香草醛的影响 | 第31-32页 |
| 2.3.5 样品检测——HPLC高效液相检测 | 第32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-37页 |
| 2.4.0 香草醛样品 HPLC 测定 | 第32-33页 |
| 2.4.1 香草醛的标准曲线测定 | 第33-34页 |
| 2.4.2 底物加入量对转化的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.3 时间对转化的影响 | 第35页 |
| 2.4.4 p H 对转化的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.5 加菌量对转化的影响 | 第36页 |
| 2.4.6 壳聚糖膜加量对转化的影响 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 ISO定点饱和突变对生物转化的作用 | 第38-60页 |
| 3.1 前言 | 第38-39页 |
| 3.2 实验仪器与试剂 | 第39-41页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第39-41页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-48页 |
| 3.3.1 克隆PCR | 第41-44页 |
| 3.3.2 感受态细胞的制备、转化及测序鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 突变后异丁香酚单加氧酶的诱导表达 | 第45-48页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第48-58页 |
| 3.4.1 YASARA软件建立结构模型 | 第48-50页 |
| 3.4.2 ISO定点饱和突变 | 第50页 |
| 3.4.3 转化子DNA测序 | 第50-53页 |
| 3.4.4 SDS-PAGE电泳 | 第53-54页 |
| 3.4.5 ISO定点饱和突变对转化异丁香酚生成香草醛的研究 | 第54-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-60页 |
| 第4章 异丁香酚单加氧酶在毕赤酵母中的酶学特性研究 | 第60-73页 |
| 4.1 前言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第60-62页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第60页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第60-61页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第61页 |
| 4.2.4 相关溶液与缓冲溶液的配制 | 第61-62页 |
| 4.2.5 培养基 | 第62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-66页 |
| 4.3.1 构建毕赤酵母工程菌 | 第62-63页 |
| 4.3.2 细胞培养条件优化 | 第63-64页 |
| 4.3.3 细胞培养 | 第64页 |
| 4.3.4 酵母冻干粉的制备 | 第64页 |
| 4.3.5 粗酶液的制备 | 第64页 |
| 4.3.6 SDS-PAGE电泳 | 第64-65页 |
| 4.3.7 转化条件对毕赤酵母转化异丁香酚生成香草醛的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.8 样品检测——HPLC高效液相检测 | 第66页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第66-72页 |
| 4.4.1 SDS-PAGE电泳 | 第66-67页 |
| 4.4.2 毕赤酵母在甲醇液体培养基对细胞培养影响的研究 | 第67-69页 |
| 4.4.3 异丁香酚单加氧酶在毕赤酵母中转化异丁香酚生成香草醛的研究 | 第69-72页 |
| 4.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 第5章 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
