| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·杜氏盐藻对盐胁迫的渗透响应 | 第11-12页 |
| ·甘油作为渗透物的代谢调控 | 第12-13页 |
| ·杜氏盐藻离子渗透机制 | 第13-15页 |
| ·Na~+跨膜转运 | 第13-14页 |
| ·K~+跨膜转运 | 第14页 |
| ·Ca~(~(2+))跨膜转运 | 第14页 |
| ·细胞质膜H~+-ATPase | 第14-15页 |
| ·调控酶3-磷酸甘油脱氢酶 | 第15-16页 |
| ·生物信息学在蛋白质组学中的作用 | 第16-18页 |
| ·藻类基因工程展望 | 第18-19页 |
| ·本论文的研究内容、目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 杜氏盐藻GPDH 基因的克隆及序列分析 | 第21-42页 |
| ·试验材料 | 第21-24页 |
| ·藻种及培养液 | 第21-22页 |
| ·质粒和菌种 | 第22页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·常用试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-35页 |
| ·杜氏盐藻的培养 | 第24页 |
| ·提取RNA 的预处理 | 第24-25页 |
| ·杜氏盐藻RNA 的提取 | 第25-27页 |
| ·总RNA 纯度和含量的检测 | 第27页 |
| ·RT-PCR | 第27-29页 |
| ·杜氏盐藻GPDH 基因保守片段的扩增 | 第29-30页 |
| ·步移PCR 获得盐藻GPDH 基因的全序列 | 第30-32页 |
| ·DNA 凝胶片段的回收 | 第32-33页 |
| ·感受态细胞的制备、转化及验证 | 第33-35页 |
| ·杜氏盐藻GPDH 基因克隆结果 | 第35-41页 |
| ·杜氏盐藻总RNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·杜氏盐藻cDNA 的检测与收集 | 第36页 |
| ·杜氏盐藻GPDH 基因保守性比对 | 第36-37页 |
| ·杜氏盐藻GPDH 基因片段的PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·杜氏盐藻GPDH 基因cDNA 的克隆 | 第38-39页 |
| ·杜氏盐藻GPDH 基因测序结果 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41页 |
| ·本章小节 | 第41-42页 |
| 第三章 杜氏盐藻GPDH 基因cDNA 及蛋白质的生物信息学分析 | 第42-54页 |
| ·分析方法 | 第42-44页 |
| ·ORF 分析及预测蛋白质GPDH 的基本性质分析 | 第42页 |
| ·序列相似性搜索 | 第42页 |
| ·多重序列比对及构建系统发育树 | 第42-43页 |
| ·结构功能域分析 | 第43页 |
| ·信号肽分析 | 第43页 |
| ·跨膜结构分析 | 第43页 |
| ·亲疏水性分析 | 第43页 |
| ·细胞学定位分析 | 第43页 |
| ·二级结构分析 | 第43-44页 |
| ·三级结构分析 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-52页 |
| ·ORF 分析及预测蛋白质GPDH 的基本性质分析 | 第44-45页 |
| ·序列相似性搜索 | 第45-46页 |
| ·多重序列比对及构建系统发育树 | 第46-47页 |
| ·结构功能域分析 | 第47-49页 |
| ·蛋白质的信号肽分析 | 第49-50页 |
| ·跨膜结构分析 | 第50-51页 |
| ·亲疏水性分析 | 第51页 |
| ·细胞学定位分析 | 第51页 |
| ·二级结构分析 | 第51-52页 |
| ·三级结构分析 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 重组杜氏盐藻GPDH 基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第54-74页 |
| ·材料和方法 | 第54-57页 |
| ·质粒和菌种 | 第54页 |
| ·酶制剂和试剂盒 | 第54-55页 |
| ·试剂 | 第55-57页 |
| ·仪器 | 第57页 |
| ·层析柱 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-64页 |
| ·盐生杜氏藻GPDH 基因的酶切位点分析 | 第57页 |
| ·盐生杜氏藻GPDH 基因ORF 扩增引物的设计 | 第57页 |
| ·盐生杜氏藻GPDH 基因ORF 序列的扩增 | 第57-58页 |
| ·质粒的提取 | 第58-59页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·测序 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE 的配制 | 第60-61页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第61-62页 |
| ·大量表达 | 第62-63页 |
| ·亲和层析 | 第63-64页 |
| ·结果 | 第64-72页 |
| ·杜氏盐藻GPDH 基因的酶切位点分析 | 第64-65页 |
| ·GPDH ORF 的扩增 | 第65-66页 |
| ·载体GPDH-pET-32a 的构建和转化 | 第66-67页 |
| ·测序结果 | 第67页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测蛋白表达 | 第67-70页 |
| ·亲和层析 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72页 |
| ·本章小结 | 第72-74页 |
| 结论与展望 | 第74-76页 |
| 结论 | 第74页 |
| 展望 | 第74-75页 |
| 论文创新点 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 缩略词对照表 | 第82-84页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附件 | 第86页 |
