| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第16-19页 |
| 第一章 猪LSM14A基因抑制PRRSV复制的功能研究 | 第19-79页 |
| 1 前言 | 第19-31页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第19-20页 |
| 1.2 文献综述 | 第20-30页 |
| 1.2.1 猪繁殖与呼吸综合征及其研究进展 | 第20-26页 |
| 1.2.2 模式识别受体及LSM14A基因的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.2.3 干扰素与干扰素诱导基因 | 第28-30页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-53页 |
| 2.1 技术路线 | 第31页 |
| 2.2 材料 | 第31-38页 |
| 2.2.1 细胞系、病毒及RNA样品 | 第31-32页 |
| 2.2.2 菌株及载体 | 第32-33页 |
| 2.2.3 试剂和试剂盒 | 第33-34页 |
| 2.2.4 主要试剂配制 | 第34-37页 |
| 2.2.5 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.3 方法 | 第38-53页 |
| 2.3.1 载体构建及质粒提取 | 第38-41页 |
| 2.3.2 细胞复苏、培养及冻存 | 第41-42页 |
| 2.3.3 转染实验 | 第42页 |
| 2.3.4 PRRSV制备、收取、毒力测定及感染实验 | 第42-43页 |
| 2.3.5 猪肺泡巨噬细胞获取及培养 | 第43-44页 |
| 2.3.6 腺病毒载体制备 | 第44-45页 |
| 2.3.7 RNA抽提及反转录 | 第45-47页 |
| 2.3.8 RNA干扰回复实验 | 第47页 |
| 2.3.9 qRT-PCR | 第47-50页 |
| 2.3.10 免疫荧光 | 第50页 |
| 2.3.11 DAPI染核 | 第50页 |
| 2.3.12 双荧光素酶报告基因实验 | 第50-51页 |
| 2.3.13 动物实验 | 第51页 |
| 2.3.14 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 2.3.15 主要分子生物学软件 | 第52页 |
| 2.3.16 主要数据库及在线分析工具 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-74页 |
| 3.1 抗病候选基因的筛选 | 第53-54页 |
| 3.1.1 抗病候选基因的获取 | 第53-54页 |
| 3.1.2 抗病候选基因的筛选 | 第54页 |
| 3.2 定量PCR检测Marc-145细胞中LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第54-59页 |
| 3.2.1 过表达LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第54-56页 |
| 3.2.2 干扰LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第56-57页 |
| 3.2.3 siRNA干扰回复实验 | 第57-59页 |
| 3.3 免疫荧光分析Marc-145细胞中LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第59-63页 |
| 3.3.1 过表达LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第59-61页 |
| 3.3.2 干扰LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第61-63页 |
| 3.4 PRRSV空斑实验分析Marc-145细胞中LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第63-64页 |
| 3.4.1 过表达LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第63-64页 |
| 3.4.2 干扰LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第64页 |
| 3.5 定量PCR检测PAMs中LSM14A对PRRSV复制的影响 | 第64-67页 |
| 3.5.1 过表达LSM14A对PRRSV在PAMs中复制的影响 | 第64-66页 |
| 3.5.2 干扰LSM14A对PRRSV在PAMs中复制的影响 | 第66-67页 |
| 3.6 过表达LSM14A对IFN-β抗病毒信号通路的影响 | 第67-70页 |
| 3.6.1 过表达LSM14A对IFN-β、ISRE启动子活性的影响 | 第67-68页 |
| 3.6.2 过表达LSM14A对IFN-β表达水平的影响 | 第68-69页 |
| 3.6.3 过表达LSM14A对RIG-I表达水平的影响 | 第69页 |
| 3.6.4 过表达LSM14A对IFN下游ISGs的影响 | 第69-70页 |
| 3.7 过表达LSM14A对TNF-α及LL-6表达水平的影响 | 第70-71页 |
| 3.8 人工感染PRRSV后对LSM14A基因表达的影响 | 第71-74页 |
| 3.8.1 人工感染PRRSV后对PAMs中LSM14A基因表达的影响 | 第72-73页 |
| 3.8.2 人工感染PRRSV后对脾、肺和淋巴结中LSM14A基因表达的影响 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-77页 |
| 4.1 关于本研究的思路 | 第74页 |
| 4.2 LSM14A基因抑制PRRSV复制 | 第74-75页 |
| 4.3 LSM14A基因抑制PRRSV复制的机制研究 | 第75-76页 |
| 4.4 人工感染PRRSV实验中LSM14A基因被抑制 | 第76-77页 |
| 5 小结 | 第77-79页 |
| 5.1 本研究的主要结论 | 第77页 |
| 5.2 本研究的创新点 | 第77-78页 |
| 5.3 本研究不足之处与进一步工作的建议 | 第78-79页 |
| 第二章 G4基因激活NF-κB的功能研究 | 第79-111页 |
| 1 前言 | 第79-87页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第79页 |
| 1.2 文献综述 | 第79-86页 |
| 1.2.1 MHC-Ⅳ区中的基因 | 第79-82页 |
| 1.2.2 NF-κB信号通路与炎症反应 | 第82-85页 |
| 1.2.3 G4基因的相关研究进展 | 第85-86页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第86-87页 |
| 2 材料与方法 | 第87-95页 |
| 2.1 技术路线 | 第87页 |
| 2.2 材料 | 第87-90页 |
| 2.2.1 实验中所用细胞系 | 第87页 |
| 2.2.2 实验动物 | 第87页 |
| 2.2.3 菌株 | 第87-88页 |
| 2.2.4 载体 | 第88-89页 |
| 2.2.5 试剂和试剂盒 | 第89页 |
| 2.2.6 主要仪器设备 | 第89-90页 |
| 2.3 方法 | 第90-95页 |
| 2.3.1 载体构建 | 第90-91页 |
| 2.3.2 激光共聚焦成像 | 第91-92页 |
| 2.3.3 免疫组化 | 第92-93页 |
| 2.3.4 双荧光素酶报告基因实验 | 第93-94页 |
| 2.3.5 主要分子生物学软件 | 第94页 |
| 2.3.6 主要数据库及在线分析工具 | 第94-95页 |
| 3 结果 | 第95-105页 |
| 3.1 G4是MHC-Ⅳ中激活NF-κB的基因 | 第95-98页 |
| 3.1.1 MHC-Ⅳ中候选基因的选择 | 第95页 |
| 3.1.2 候选基因对NF-κB的激活研究 | 第95-96页 |
| 3.1.3 过表达G4基因诱导p65入核 | 第96-98页 |
| 3.2 G4蛋白的分布特征 | 第98-101页 |
| 3.2.1 G4蛋白有膜分布趋势并与早期内涵体共定位 | 第98-99页 |
| 3.2.2 小鼠内源G4蛋白主要分布于膀胱和肺上皮细胞 | 第99-101页 |
| 3.3 G4基因激活NF-κB依赖IKK复合物而非TAK1复合物 | 第101-105页 |
| 3.3.1 G4基因激活NF-κB不能被TAK1复合物抑制剂阻断 | 第102-103页 |
| 3.3.2 G4基因激活NF-κB不能被TAK1(K63W)阻断 | 第103-104页 |
| 3.3.3 G4基因激活NF-κB依赖IKK复合物 | 第104-105页 |
| 4 讨论 | 第105-109页 |
| 4.1 关于本研究的思路 | 第105页 |
| 4.2 MHC-Ⅳ区中激活NF-κB信号通路基因的筛选 | 第105-106页 |
| 4.3 G4蛋白的亚细胞定位及生理状态下的分布 | 第106-107页 |
| 4.4 G4基因激活NF-κB信号通路的途径 | 第107-109页 |
| 5 小结 | 第109-111页 |
| 5.1 本研究的主要结论 | 第109页 |
| 5.2 本研究的创新点 | 第109页 |
| 5.3 本研究不足之处与进一步工作的建议 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-129页 |
| 攻读学位期间撰写论文题录 | 第129-130页 |
| 附录 | 第130-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
