| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-25页 |
| 第一章 多能性干细胞向生殖细胞诱导的研究进展 | 第15-23页 |
| 1.1 小鼠生殖细胞的体内发育过程 | 第15-18页 |
| 1.1.1 PGC的形成 | 第15-16页 |
| 1.1.2 精子发生 | 第16-17页 |
| 1.1.3 卵子发生 | 第17-18页 |
| 1.2 多能性干细胞向原始生殖细胞诱导的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 原始生殖细胞体外进行配子发生的研究进展 | 第20-23页 |
| 第二章 Eif2s3y基因研究进展 | 第23-25页 |
| 试验部分 | 第25-100页 |
| 第三章 小鼠胚胎干细胞向精细胞体外诱导体系的建立 | 第25-56页 |
| 3.1 试验材料和仪器 | 第26页 |
| 3.1.1 细胞，动物和主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-36页 |
| 3.2.1 主要溶液配制 | 第26-28页 |
| 3.2.2 诱导液配制 | 第28-29页 |
| 3.2.3 诱导方法的建立 | 第29-30页 |
| 3.2.4 构建Acrosin Promoter报告载体 | 第30-32页 |
| 3.2.5 MEF及饲养层细胞的制备 | 第32-33页 |
| 3.2.6 稳转Acrosin Promoter的mESC细胞株的建立 | 第33页 |
| 3.2.7 总RNA提取及反转录 | 第33-34页 |
| 3.2.8 qRT-PCR | 第34页 |
| 3.2.9 细胞免疫荧光染色 | 第34-35页 |
| 3.2.10 流式细胞术检测 | 第35-36页 |
| 3.2.11 小鼠输出管移植 | 第36页 |
| 3.2.12 组织切片制备 | 第36页 |
| 3.3 结果 | 第36-54页 |
| 3.3.1 稳转Acrosin promoter的mESC细胞株的建立 | 第36-38页 |
| 3.3.2 mESC向EpiLC的诱导分化 | 第38-40页 |
| 3.3.3 EpiLC向PGCLC的诱导分化 | 第40-44页 |
| 3.3.4 PGCLC向SSCLC的体外诱导分化。 | 第44-50页 |
| 3.3.5 SSLC向SLC的诱导分化 | 第50-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 Eif2s3y对mESC自我更新的影响 | 第56-73页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第56页 |
| 4.1.1 细胞和主要试剂 | 第56页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第56页 |
| 4.2 方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 qRT-PCR | 第56页 |
| 4.2.2 细胞免疫荧光染色 | 第56-57页 |
| 4.2.3 Western Blot | 第57页 |
| 4.2.4 Eif2s3y慢病毒表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 4.2.5 细胞增殖分析 | 第58页 |
| 4.2.6 输出管移植 | 第58页 |
| 4.2.7 组织切片的免疫组化分析 | 第58-59页 |
| 4.2.8 病毒包装及感染 | 第59页 |
| 4.3 结果 | 第59-70页 |
| 4.3.0 Eif2s3y超表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 4.3.1 体外获得四株超表达Eif2s3y的mESC的单细胞克隆 | 第60-61页 |
| 4.3.2 Eif2s3y使mESC多能性下调 | 第61-63页 |
| 4.3.3 Eif2s3y降低mESC的分化能力 | 第63-65页 |
| 4.3.4 Eif2s3y降低mESC中TET1及组蛋白甲基化水平 | 第65-67页 |
| 4.3.5 Eif2s3y提高mESC的增殖能力 | 第67-70页 |
| 4.4 讨论 | 第70-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-73页 |
| 第五章 Eif2s3y促进SSC的分化 | 第73-81页 |
| 5.1 材料和仪器 | 第73页 |
| 5.1.1 细胞，动物和主要试剂 | 第73页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第73页 |
| 5.2 方法 | 第73-74页 |
| 5.2.2 细胞培养 | 第73页 |
| 5.2.3 细胞转染 | 第73页 |
| 5.2.4 病毒包装及感染 | 第73-74页 |
| 5.2.5 qRT-PCR | 第74页 |
| 5.2.6 细胞免疫荧光染色 | 第74页 |
| 5.3 结果 | 第74-79页 |
| 5.3.1 Eif2s3y在不同年龄段的睾丸细胞中的差异表达 | 第74-75页 |
| 5.3.2 Eif2s3y在不同类型睾丸细胞中的表达 | 第75页 |
| 5.3.4 Eif2s3y的超表达对GC-1 细胞的影响 | 第75-78页 |
| 5.3.5 Eif2s3y基因的干扰对GC-1 细胞的影响 | 第78-79页 |
| 5.4 讨论 | 第79-80页 |
| 5.5 小结 | 第80-81页 |
| 第六章 Eif2s3y提高mESC向精细胞的诱导效率 | 第81-100页 |
| 6.1 材料和仪器 | 第81页 |
| 6.1.1 细胞，动物和主要试剂 | 第81页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第81页 |
| 6.2 方法 | 第81-83页 |
| 6.2.1 主要溶液配制 | 第81页 |
| 6.2.2 诱导液配制及诱导方法的建立 | 第81-82页 |
| 6.2.3 稳转Acrosin promoter的ES-CAGG及ES-Eif2s3y细胞株的建立 | 第82页 |
| 6.2.4 总RNA提取及反转录 | 第82页 |
| 6.2.5 qRT-PCR | 第82页 |
| 6.2.6 细胞免疫荧光染色 | 第82页 |
| 6.2.7 流式细胞术检测 | 第82页 |
| 6.2.8 小鼠输出管移植 | 第82页 |
| 6.2.9 组织切片及HE染色分析 | 第82-83页 |
| 6.3 结果 | 第83-98页 |
| 6.3.1 ES-CAGG及ES-Eif2s3y向Epi LCs的诱导分化 | 第83-86页 |
| 6.3.2 Epi LC向PGCLC的体外诱导 | 第86-87页 |
| 6.3.3 PGCLC向SSCLC的诱导分化 | 第87-90页 |
| 6.3.4 Eif2s3y促进SSCLC的分化 | 第90-93页 |
| 6.3.5 SSCLC向SLC的诱导分化 | 第93-96页 |
| 6.3.6 Eif2s3y提高精子细胞的诱导效率 | 第96-98页 |
| 6.4 讨论 | 第98-99页 |
| 6.5 小结 | 第99-100页 |
| 结论 | 第100-101页 |
| 创新之处及未来研究计划 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
| 附录 | 第113-116页 |
| 缩略词 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 作者简介 | 第118页 |
