| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 昆虫免疫概述 | 第11页 |
| 1.2 体液免疫 | 第11-12页 |
| 1.3 细胞免疫 | 第12页 |
| 1.4 免疫相关蛋白 | 第12-22页 |
| 1.4.1 模式识别受体 | 第12-13页 |
| 1.4.2 凝集素 | 第13-14页 |
| 1.4.3 类免疫球蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4.4 抗菌肽 | 第15-17页 |
| 1.4.5 溶菌酶 | 第17页 |
| 1.4.6 酚氧化酶 | 第17-18页 |
| 1.4.7 蛋白酶抑制剂 | 第18-20页 |
| 1.4.8 载脂蛋白 | 第20-22页 |
| 第二章 引言 | 第22-24页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第22页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2.2.1 cDNA消减文库的构建 | 第22页 |
| 2.2.2 免疫相关基因的表达分析 | 第22页 |
| 2.2.3 Apolipophorin Ⅲ基因克隆与表达分析 | 第22-23页 |
| 2.3 技术路线 | 第23-24页 |
| 第三章 材料与方法 | 第24-28页 |
| 3.1 实验材料 | 第24页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第24-28页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第24页 |
| 3.2.2 主要生化试剂 | 第24-25页 |
| 3.2.3 常用溶液的配置 | 第25-28页 |
| 第四章 柞蚕蛹脂肪体cDNA消减文库的构建与分析 | 第28-52页 |
| 4.1 材料与方法 | 第28-38页 |
| 4.1.1 组织的收集与处理 | 第28页 |
| 4.1.2 注射灭活的大肠杆菌 | 第28页 |
| 4.1.3 RNA的提取 | 第28-29页 |
| 4.1.4 提取的总RNA的质量检测 | 第29页 |
| 4.1.5 mRNA分离纯化 | 第29-30页 |
| 4.1.6 抑制性消减杂交 | 第30-38页 |
| 4.1.6.1 cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 4.1.6.2 cDNA第二链的合成 | 第31页 |
| 4.1.6.3 cDNA的检测 | 第31页 |
| 4.1.6.4 Rsa I酶切双链cDNA | 第31-32页 |
| 4.1.6.5 接头连接 | 第32页 |
| 4.1.6.6 第一次杂交 | 第32-33页 |
| 4.1.6.7 第二次杂交 | 第33-34页 |
| 4.1.6.8 两次PCR扩增 | 第34-35页 |
| 4.1.6.9 连接效率检测 | 第35-36页 |
| 4.1.6.10 消减效率检测 | 第36-37页 |
| 4.1.6.11 PCR扩增后目的产物的纯化 | 第37页 |
| 4.1.6.12 目的产物的连接和转化 | 第37-38页 |
| 4.1.7 序列注释与功能分类 | 第38页 |
| 4.1.8 柞蚕抗菌肽-4和溶菌酶的序列分析 | 第38页 |
| 4.2 结果 | 第38-52页 |
| 4.2.1 柞蚕总RNA的检测 | 第38-39页 |
| 4.2.2 柞蚕mRNA的检测 | 第39页 |
| 4.2.3 Rsa I酶切及纯化 | 第39-40页 |
| 4.2.4 连接效率分析 | 第40页 |
| 4.2.5 消减效率分析 | 第40-41页 |
| 4.2.6 消减文库的构建 | 第41页 |
| 4.2.7 消减cDNA文库插入片段的鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2.8 测序结果分析与功能分类 | 第42-47页 |
| 4.2.9 柞蚕抗菌肽-4和溶菌酶的序列分析 | 第47-52页 |
| 第五章 柞蚕部分免疫相关基因的表达分析 | 第52-60页 |
| 5.1 材料与方法 | 第52-55页 |
| 5.1.1 柞蚕组织的收集与处理 | 第52页 |
| 5.1.2 注射灭活的大肠杆菌 | 第52页 |
| 5.1.3 RNA的提取 | 第52-53页 |
| 5.1.4 提取的总RNA的质量检测 | 第53页 |
| 5.1.5 第一链cDNA的合成 | 第53页 |
| 5.1.6 部分免疫相关基因表达分析 | 第53-55页 |
| 5.2 结果 | 第55-60页 |
| 5.2.1 柞蚕的总RNA的检测 | 第55页 |
| 5.2.2 柞蚕部分免疫相关基因表达水平的研究 | 第55-60页 |
| 第六章 柞蚕Apolipophorin Ⅲ基因的鉴定与表达分析 | 第60-78页 |
| 6.1 | 第60-68页 |
| 6.1.1 柞蚕组织的收集与处理 | 第60页 |
| 6.1.2 注射灭活的微生物 | 第60页 |
| 6.1.3 柞蚕RNA的提取 | 第60页 |
| 6.1.4 总RNA的质量检测 | 第60-61页 |
| 6.1.5 第一链cDNA的合成 | 第61页 |
| 6.1.6 柞蚕Apolipophorin Ⅲ基因的全长cDNAPCR扩增 | 第61-64页 |
| 6.1.6.1 PCR引物设计 | 第61页 |
| 6.1.6.2 5'RACE与3'RACE反转录体系 | 第61-62页 |
| 6.1.6.3 RACE-PCR扩增 | 第62-63页 |
| 6.1.6.4 PCR扩增后目的产物的纯化 | 第63页 |
| 6.1.6.5 目的片段的连接、转化、测序和序列拼接 | 第63-64页 |
| 6.1.7 柞蚕Apolipophorin Ⅲ的原核表达 | 第64-65页 |
| 6.1.7.1 柞蚕Apolipophorin Ⅲ表达片段的扩增 | 第64页 |
| 6.1.7.2 表达表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 6.1.7.3 重组蛋白的诱导表达 | 第65页 |
| 6.1.7.4 SDS-PAGE电泳检测 | 第65页 |
| 6.1.8 Western blotting分析 | 第65-66页 |
| 6.1.9 重组蛋白的大量诱导及纯化 | 第66页 |
| 6.1.9.1 重组蛋白的可溶性分析 | 第66页 |
| 6.1.9.2 重组蛋白的纯化 | 第66页 |
| 6.1.10 柞蚕Apolipophorin Ⅲ氨基酸序列分析、空间结构和系统进化树构建 | 第66-67页 |
| 6.1.11 柞蚕Apolipophorin Ⅲ表达分析 | 第67-68页 |
| 6.2 结果 | 第68-78页 |
| 6.2.1 柞蚕的总RNA的检测 | 第68页 |
| 6.2.2 柞蚕Apolipophorin Ⅲ基因序列的测定和分析 | 第68-69页 |
| 6.2.3 原核表达载体的构建 | 第69-72页 |
| 6.2.3.1 柞蚕Apolipophorin Ⅲ表达片段的扩增 | 第69-70页 |
| 6.2.3.2 双酶切鉴定 | 第70页 |
| 6.2.3.3 IPTG不同诱导浓度的原核表达 | 第70-71页 |
| 6.2.3.4 Western blotting检测 | 第71-72页 |
| 6.2.4 柞蚕与其他昆虫Apolipophorin Ⅲ蛋白的同源性分析 | 第72-75页 |
| 6.2.5 柞蚕Apolipophorin Ⅲ基因的表达分析 | 第75-76页 |
| 6.2.6 外源物刺激下柞蚕Apolipophorin Ⅲ基因的表达分析 | 第76-78页 |
| 讨论 | 第78-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 个人简介 | 第99页 |
| 参与课题 | 第99-100页 |
| 发表论文 | 第100页 |
