| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语对照表 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 先天性甲状腺功能减退概述 | 第12页 |
| 1.2 甲状腺球蛋白基因的作用 | 第12-13页 |
| 1.3 TG基因突变与CH临床表型的关系 | 第13-14页 |
| 1.4 TG突变的特点及研究现状 | 第14页 |
| 1.5 TG突变在不同人群中的分布 | 第14-15页 |
| 1.6 立题背景与意义 | 第15-18页 |
| 第二章 实验方法的建立 | 第18-36页 |
| 2.1 实验整体设计思路 | 第18页 |
| 2.2 样本 | 第18-22页 |
| 2.3 实验材料 | 第22页 |
| 2.3.1 实验仪器 | 第22页 |
| 2.3.2 实验试剂和材料 | 第22页 |
| 2.4 TG二代测序扩增引物的设计 | 第22-25页 |
| 2.5 全血基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.6 TG基因外显子和部分内含子区域的二代测序 | 第26-32页 |
| 2.6.1 TG基因外显子和内含子测序的原理 | 第26页 |
| 2.6.2 文库的扩增 | 第26-27页 |
| 2.6.3 DNA文库的纯化 | 第27-28页 |
| 2.6.4 文库定量 | 第28页 |
| 2.6.5 模板制备 | 第28页 |
| 2.6.6 准备扩增反应所需试剂制备模板 | 第28-29页 |
| 2.6.7 清洗Ion OneTouch 2 | 第29-30页 |
| 2.6.8 模板富集 | 第30页 |
| 2.6.9 测序前清洗 | 第30页 |
| 2.6.10 测序洗和初始化 | 第30-31页 |
| 2.6.11 准备测序芯片 | 第31页 |
| 2.6.12 检测测序芯片 | 第31页 |
| 2.6.13 测序引物与模板混合 | 第31页 |
| 2.6.14 装载芯片 | 第31-32页 |
| 2.6.15 清洗关机 | 第32页 |
| 2.7 一代测序验证 | 第32-34页 |
| 2.7.1 Sanger测序验证的方法和原理 | 第32-33页 |
| 2.7.2 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.7.3 Sanger测序实验过程 | 第34页 |
| 2.8 生物信息学分析 | 第34-36页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第36-60页 |
| 3.1 二代测序结果 | 第36-43页 |
| 3.1.1 Ion Torrent PGM总体测序结果 | 第36页 |
| 3.1.2 测序参数 | 第36-40页 |
| 3.1.3 各样本TG突变统计 | 第40-43页 |
| 3.2 一代测序结果 | 第43-46页 |
| 3.2.1 突变位点PCR | 第43页 |
| 3.2.2 部分位点一代测序结果 | 第43-46页 |
| 3.3 突变位点信息 | 第46-48页 |
| 3.4 计算机生物学结果与分析 | 第48-49页 |
| 3.5 序列保守性分析 | 第49-53页 |
| 3.6 同源建模结果 | 第53-54页 |
| 3.7 致病等级划分 | 第54-57页 |
| 3.8 TG突变与临床表型分析 | 第57页 |
| 3.9 本章小结 | 第57-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-62页 |
| 全文总结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |