| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 综述部分 | 第12-42页 |
| 第一章 动物乳腺生物反应器的研究概况 | 第12-18页 |
| 1.1 哺乳动物乳腺生物反应器 | 第12-13页 |
| 1.2 乳腺生物反应器的研究原理 | 第13页 |
| 1.3 乳腺生物反应器的特点 | 第13-14页 |
| 1.4 动物乳腺生物反应器存在问题 | 第14-15页 |
| 1.5 乳腺生物反应器生产药用蛋白 | 第15-17页 |
| 1.6 总结与展望 | 第17-18页 |
| 第二章 CRISPR/CAS9介导的基因编辑技术 | 第18-31页 |
| 2.1 基因编辑技术 | 第18-20页 |
| 2.2 CRISPR/CAS9的定义与作用机理 | 第20-25页 |
| 2.3 CRISPR系统的应用 | 第25-28页 |
| 2.4 CRSIPR/CAS9系统的优势与局限性 | 第28-29页 |
| 2.5 展望 | 第29-31页 |
| 第三章 TNF-A背景介绍及应用 | 第31-35页 |
| 3.1 TNF-A简介 | 第31-32页 |
| 3.2 TNF-A的生物学作用 | 第32页 |
| 3.3 TNF-A的应用 | 第32-34页 |
| 3.4 TNF-A的应用前景 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-42页 |
| 实验部分 | 第42-72页 |
| 第一章 同源重组载体和CRISPR/CAS载体的构建 | 第42-59页 |
| 引言 | 第42-43页 |
| 1. 材料与方法 | 第43-50页 |
| 1.1 实验材料 | 第43页 |
| 1.2 实验方法 | 第43-50页 |
| 2. 结果与分析 | 第50-55页 |
| 2.1 TNF-α基因编码区的克隆 | 第50-53页 |
| 2.2 同源重组载体PIII-LTPR的构建 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-56页 |
| 小结 | 第56-59页 |
| 第二章 细胞转染及TNF-A的表达检测 | 第59-70页 |
| 引言 | 第59-60页 |
| 1. 材料与方法 | 第60-63页 |
| 1.1 实验材料 | 第60页 |
| 1.2 实验方法 | 第60-63页 |
| 2. 结果与分析 | 第63-67页 |
| 2.1 牛胎儿成纤维细胞传代培养观察 | 第63页 |
| 2.2 牛胎儿成纤维细胞生长曲线 | 第63-64页 |
| 2.3 牛胎儿成纤维细胞G418致死浓度 | 第64页 |
| 2.4 阳性细胞克隆的挑取与扩大培养 | 第64-65页 |
| 2.5 转TNF-A基因阳性细胞的鉴定 | 第65-66页 |
| 2.6 跨臂区的PCR鉴定 | 第66页 |
| 2.7 RT-PCR鉴定 | 第66-67页 |
| 2.8 Western Blot检测 | 第67页 |
| 讨论 | 第67-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-72页 |
| 附图 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |