| 中文摘要 | 第11-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一部分 CRKL下调促进K562向红系分化 | 第20-34页 |
| 材料和方法 | 第20-26页 |
| 1. 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 临床样本和细胞系 | 第20页 |
| 1.2 主要仪器及试剂 | 第20-21页 |
| 2. 方法 | 第21-26页 |
| 2.1 CML、非恶性白血病患者骨髓及正常人单个核细胞复苏 | 第21页 |
| 2.2 细胞复苏与培养 | 第21-22页 |
| 2.3 qRT-PCR鉴定CML、非恶性白血病患者骨髓及正常人中CRKL基因表达 | 第22-23页 |
| 2.4 联苯胺染色法检测Hemin诱导K562分化及对CRKL的影响 | 第23页 |
| 2.5 qRT-PCR鉴定相关基因表达 | 第23-24页 |
| 2.6 WB法检测CRKL和Raf/MEK/ERK/Elk-1 通路分子水平 | 第24-25页 |
| 2.7 基因芯片检测CRKL表达下调后K562中水平变化基因 | 第25页 |
| 2.8 检测CRKL下调后K562蛋白质组变化 | 第25页 |
| 2.9 PD98059对CRKL下调K562中相关分子水平的影响 | 第25页 |
| 2.10 数据处理及统计学分析 | 第25-26页 |
| 结果 | 第26-32页 |
| 1. CRKL在CML、非恶性白血病患者骨髓及正常人表达水平检测 | 第26-27页 |
| （1）CRKL在非恶性白血病患者骨髓中表达上调 | 第26页 |
| （2）CRKL在CML初发患者骨髓中表达上调 | 第26页 |
| （3）CRKL在CML初发-完全缓解（CR）患者骨髓中表达情况 | 第26-27页 |
| 2. Hemin诱导K562红系分化CRKL表达受到抑制 | 第27-28页 |
| 3. CRKL稳定下调对红系分化的影响 | 第28-30页 |
| （1）CRKL下调增加K562蓝色阳性细胞率和红系分子表达 | 第28页 |
| （2）蛋白质组学图谱及质谱鉴定结果 | 第28-30页 |
| 4. CRKL对Raf/MEK/ERK/Elk-1 通路分子水平的影响 | 第30-32页 |
| （1）CRKL稳定下调增强Raf/MEK/ERK/Elk-1 通路的活性 | 第30页 |
| （2）ERK通路抑制后Elk-1、GPA和 γ-globin表达降低 | 第30-32页 |
| 讨论 | 第32-33页 |
| 结论 | 第33-34页 |
| 第二部分 CRKⅡ下调对K562分化、增殖、迁移和侵袭能力的影响 | 第34-45页 |
| 材料和方法 | 第34-38页 |
| 1. 材料 | 第34-35页 |
| 1.1 临床样本和细胞系 | 第34页 |
| 1.2 主要仪器设备和试剂 | 第34-35页 |
| 2. 方法 | 第35-38页 |
| 2.1 CML、非恶性白血病患者骨髓及正常人单个核细胞复苏 | 第35页 |
| 2.2 细胞复苏与培养 | 第35页 |
| 2.3 qRT-PCR鉴定CML、非恶性白血病患者骨髓及正常人中CRKⅡ基因表达 | 第35页 |
| 2.4 siRNA-CRKⅡ序列设计 | 第35页 |
| 2.5 siRNA- CRKⅡ瞬时转染K562细胞 | 第35-36页 |
| 2.6 WB法检测CRKⅡ在K562中下调效率和相关分子变化 | 第36页 |
| 2.7 CCK-8 法检测CRKⅡ下调对K562体外增殖能力的影响 | 第36页 |
| 2.8 Transwell法检测CRKⅡ下调对K562体外迁移能力影响 | 第36-37页 |
| 2.9 Transwell法检测CRKⅡ下调对K562体外侵袭能力影响 | 第37页 |
| 2.10 免疫共沉淀实验分析CRKL和CRKⅡ之间的相互作用 | 第37页 |
| 2.11 数据处理及统计学分析 | 第37-38页 |
| 结果 | 第38-43页 |
| 1. CRKⅡ在CML、非恶性白血病患者骨髓及正常人表达水平检测 | 第38-39页 |
| （1）CRKⅡ在非恶性患者骨髓中表达无明显变化 | 第38页 |
| （2）CRKⅡ在CML初发患者骨髓中表达上调 | 第38页 |
| （3）CRKⅡ在CML初发-完全患者（CR）患者骨髓中表达情况 | 第38-39页 |
| 2. 瞬时转染使CRKⅡ表达下调 | 第39页 |
| 3. CRKⅡ下调抑制K562的体外增殖能力 | 第39-40页 |
| 4. CRKⅡ下调抑制K562的体外迁移能力 | 第40页 |
| 5. CRKⅡ下调抑制K562的体外侵袭能力 | 第40-41页 |
| 6. CRKⅡ下调对K562分化能力影响不明显 | 第41页 |
| 7. CRKⅡ下调对K562相关信号通路分子水平的影响 | 第41-42页 |
| （1）CRKⅡ下调抑制p130Cas/CRK/Rac1信号通路 | 第41页 |
| （2）CRKⅡ下调对Raf/MEK/ERK信号通路分子表达无影响 | 第41-42页 |
| 8. CRKL和CRKⅡ在K562细胞中的相互作用 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 第三部分 CRKL+CRKⅡ双敲降对K562分化、增殖、迁移侵袭影响 | 第45-53页 |
| 材料和方法 | 第45-47页 |
| 1. 材料 | 第45页 |
| 1.1 细胞株 | 第45页 |
| 1.2 主要仪器设备和试剂 | 第45页 |
| 2. 方法 | 第45-47页 |
| 2.1 细胞复苏、培养 | 第45-46页 |
| 2.2 瞬时转染shRNA-CRKL-K562细胞 | 第46页 |
| 2.3 WB检测CRKⅡ及相关分子在CRKL下调细胞中表达水平 | 第46页 |
| 2.4 台盼蓝计数检测CRKL+CRKⅡ双敲降对K562增殖影响 | 第46页 |
| 2.5 Transwell法检测CRKL+CRKⅡ双敲降对K562迁移影响 | 第46页 |
| 2.6 Transwell法检测CRKL+CRKⅡ双敲降对K562侵袭影响 | 第46页 |
| 2.7 数据处理及统计学分析 | 第46-47页 |
| 结果 | 第47-51页 |
| 1. CRKL下调细胞中瞬时下调CRKⅡ的表达 | 第47-48页 |
| 2. CRKL+CRKⅡ双敲降抑制K562体外增殖 | 第48页 |
| 3. CRKL+CRKⅡ双敲降抑制K562体外迁移 | 第48-49页 |
| 4. CRKL+CRKⅡ双敲降抑制K562体外侵袭 | 第49页 |
| 5. CRKL+CRKⅡ双敲降对K562红系分化影响不明显 | 第49-50页 |
| 6. CRKL+CRKⅡ双敲降使Rac1表达水平降低 | 第50页 |
| 7. CRKL+CRKⅡ双敲降对ERK和p-ERK表达无明显影响 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 综述 CRK家族与人类恶性肿瘤 | 第57-65页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
