| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一部分 检测miR-4521, FAM129A在CML样本中表达并分析二者相关性 | 第17-25页 |
| 材料与方法 | 第17-20页 |
| 1.材料 | 第17-18页 |
| 1.1 CML样本收集 | 第17页 |
| 1.2 引物 | 第17-18页 |
| 1.3 主要仪器及试剂 | 第18页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第18页 |
| 2.方法 | 第18-20页 |
| 2.1 FAM129A,内参 β-actin引物的设计 | 第18页 |
| 2.2 提取单个核细胞中的总RNA | 第18-19页 |
| 2.3 Total RNA反转录为cDNA | 第19-20页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR反应（q RT-PCR） | 第20页 |
| 2.5 统计学分析 | 第20页 |
| 结果 | 第20-23页 |
| 1.miR-4521，FAM129A在CML骨髓样本中表达分析 | 第20-22页 |
| 2.miR-4521，FAM129A在初发CML样本中二者相关性 | 第22页 |
| 3.4例配对CML样本（初发--CR）中miR-4521，FAM129A水平比对分析 | 第22-23页 |
| 讨论 | 第23页 |
| 结论 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-25页 |
| 第二部分 MiR-4521 与FAM129A靶向负调控关系的验证 | 第25-44页 |
| 材料与方法 | 第25-36页 |
| 1.材料 | 第25-27页 |
| 1.1 细胞株 | 第25页 |
| 1.2 质粒载体及菌种 | 第25页 |
| 1.3 引物及miR-4521 mimic设计与合成 | 第25-26页 |
| 1.4 主要仪器与试剂 | 第26页 |
| 1.5 主要溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.方法 | 第27-36页 |
| 2.1 生物信息学软件分析miR-4521 与FAM129A潜在的靶向关系 | 第27-28页 |
| 2.2 PCR扩增WT-FAM129A-3'UTR目的序列 | 第28-29页 |
| 2.3 目的产物与pEASY-blunt simple克隆载体连接，转化及蓝白斑筛选 | 第29页 |
| 2.4 挑选单菌落，碱裂解法提取重组克隆质粒，双酶切及测序鉴定 | 第29-30页 |
| 2.5 psi-CHECKTM2.0-WT-FAM129A-3'UTR真 核表达质粒构建 | 第30-31页 |
| 2.6 PCR扩增MUT-FAM129A-3'UTR目的序列 | 第31-33页 |
| 2.7 miR-4521 与质粒共转染至 293T细胞，并进行双荧光素酶报告基因载体检测 | 第33-34页 |
| 2.8 qRT-PCR法检测转染mi R-4521 mimic后，FAM129A mRNA水平的表达 | 第34-35页 |
| 2.9 Western blot（WB）方法检测miR-4521 上调后FAM129A表达 | 第35页 |
| 2.10 统计学分析 | 第35-36页 |
| 结果 | 第36-40页 |
| 1.生物信息学软件预测miR-4521 和FAM129A存在潜在靶向负调控关系 | 第36页 |
| 2.psi-CHECK~(TM)2.0-WT-FAM129A-3'UTR表达质粒/psi-CHECK~（TM）2.0-MUT-FAM129A-3'UTR表达质粒的构建 | 第36-38页 |
| 3.共 转染NC mimic/miR-4521 mimic和 重组WT/MUT-FAM129A-3'UTR双荧光素酶报告基因质粒，检测荧光素酶活性 | 第38-39页 |
| 4.MiR-4521 在K562细胞中内源性靶向负调控FAM129A表达 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第三部分 MiR-4521 过表达对K562细胞恶性行为及分子机制研究 | 第44-52页 |
| 材料与方法 | 第44-45页 |
| 1.材料 | 第44页 |
| 1.1 细胞系 | 第44页 |
| 1.2 主要仪器及试剂 | 第44页 |
| 2.方法 | 第44-45页 |
| 2.1 K562细胞的复苏及培养 | 第44页 |
| 2.2 瞬时转染miR-4521mimic并检测其转染效率 | 第44页 |
| 2.3 台盼蓝计数法测定miR-4521 上调对K562细胞增殖能力的影响 | 第44-45页 |
| 2.4 Transwell小室法检测mi R-4521 上调对K562细胞迁移能力的影响 | 第45页 |
| 2.5 Transwell小室法检测miR-4521 上调对K562细胞侵袭能力的影响 | 第45页 |
| 2.6 qRT-PCR检测miR-4521 过表达后对MMP-2，MMP-9，TIMP-1 水平影响 | 第45页 |
| 2.7 统计学分析 | 第45页 |
| 结果 | 第45-48页 |
| 1.成功获得瞬时上调的K562-miR-4521 mimic细胞 | 第45-46页 |
| 2.MiR-4521 过表达抑制K562细胞体外增殖能力 | 第46页 |
| 3.MiR-4521 过表达抑制K562细胞体外迁移能力 | 第46-47页 |
| 4.MiR-4521 过表达抑制K562细胞体外侵袭能力 | 第47页 |
| 5.MiR-4521 过表达能够抑制MMP-2，MMP-9 及促进TIMP-1 表达 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 第四部分 FAM129A下调对K562细胞恶性行为及分子机制研究 | 第52-58页 |
| 材料与方法 | 第52页 |
| 1.材料 | 第52页 |
| 1.1 si-FAM129A的设计与合成 | 第52页 |
| 2.方法 | 第52页 |
| 2.1 瞬时转染si-FAM129A，检测FAM129A的下调效率 | 第52页 |
| 结果 | 第52-55页 |
| 1.成功获得瞬时下调的K562-si-FAM129A细胞 | 第52-53页 |
| 2.FAM129A下调抑制K562细胞体外增殖能力 | 第53页 |
| 3.FAM129A下调抑制K562细胞体外迁移能力 | 第53-54页 |
| 4.FAM129A下调抑制K562细胞体外侵袭能力 | 第54页 |
| 5.FAM129A下调能够抑制MMP-2，MMP-9 及促进TIMP-1 表达 | 第54-55页 |
| 讨论 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 综述 miRNA与CML相关性研究进展 | 第58-66页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
