| 第一部分 散发性结直肠癌相关候选基因3'UTR区的变异位点的确认 | 第3-40页 |
| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-14页 |
| 1.1 结直肠癌的概述 | 第9页 |
| 1.2 结直肠癌的分子发病机制 | 第9-10页 |
| 1.3 结直肠癌的环境因素 | 第10页 |
| 1.4 miRNA与基因3'UTR结合对疾病的影响 | 第10-12页 |
| 1.5 软件预测出的候选基因介绍 | 第12-14页 |
| 第二章 结直肠癌候选基因(SMAD3、TGFBR2)的3'UTR区miRNAs的筛查研究 | 第14-16页 |
| 2.1 预测步骤 | 第14-15页 |
| 2.2 预测结果 | 第15-16页 |
| 第三章 双荧光素酶报告基因检测 | 第16-34页 |
| 3.1 实验材料、试剂及仪器 | 第16-18页 |
| 3.2 目的基因(SMAD3、TGFBR2)T载体野生型、突变型的构建 | 第18-28页 |
| 3.2.1 所需溶液的配置 | 第18-19页 |
| 3.2.2 引物的设计 | 第19页 |
| 3.2.3 目的基因的PCR | 第19-20页 |
| 3.2.4 目的基因的回收 | 第20-21页 |
| 3.2.5 目的片段的pMD-18T重组载体的构建 | 第21-23页 |
| 3.2.6 目的片段碱基序列的确定 | 第23-25页 |
| 3.2.7 目的基因(TGFBR2、SMAD3)的突变型T重组载体的克隆 | 第25-26页 |
| 3.2.8 目的片段序列的确定 | 第26-28页 |
| 3.3 目的基因(SMAD3,TGFBR2)pmirGLO表达载体野生型、突变型的构建 | 第28-30页 |
| 3.3.1 利用双酶切法分离目的基因 | 第28-29页 |
| 3.3.2 表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.4 荧光素酶报告基因检测 | 第30-34页 |
| 3.4.1 所需溶液的配置 | 第30页 |
| 3.4.2 细胞培养 | 第30-31页 |
| 3.4.3 进行细胞的转染以及双荧光素酶检测 | 第31-32页 |
| 3.4.4 双荧光素酶报告基因检测结果 | 第32-34页 |
| 第四章 hsa-miR-3191-3p在细胞系中的表达水平 | 第34-38页 |
| 4.1 实验试剂及仪器 | 第34页 |
| 4.2 hsa-miR-3191-3p在不同结直肠癌系中的表达 | 第34-38页 |
| 4.2.1 实验前准备 | 第34页 |
| 4.2.2 总RNA的提取 | 第34-36页 |
| 4.2.3 Poly(A)加尾反应和反转录反应 | 第36页 |
| 4.2.4 实时定量PCR反应 | 第36-38页 |
| 讨论 | 第38-40页 |
| 第二部分 CAPN1基因载体的构建以及在不同癌细胞系中蛋白水平的表达 | 第40-59页 |
| 摘要 | 第40-41页 |
| Abstract | 第41-42页 |
| 第一章 绪论 | 第42-44页 |
| 1.1 结直肠癌概要 | 第42页 |
| 1.2 CAPN1基因简介 | 第42-44页 |
| 第二章 CAPN1基因载体的构建 | 第44-52页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第44-46页 |
| 2.2 CAPN1基因T载体的构建 | 第46-50页 |
| 2.2.1 所需溶液的配置 | 第46页 |
| 2.2.2 引物的设计 | 第46-47页 |
| 2.2.3 目的基因的PCR | 第47页 |
| 2.2.4 目的基因的回收 | 第47-48页 |
| 2.2.5 目的片段的pMD-18T重组载体的构建 | 第48-50页 |
| 2.3 CAPN1基因P载体的构建—目的基因CAPN1的pEGFP C2、pIRES2-EGFP表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 第三章 CAPN1基因在不同细胞系中蛋白水平的表达 | 第52-58页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第52页 |
| 3.2 CAPN1基因在不同癌细胞系中蛋白水平的表达 | 第52-58页 |
| 3.2.1 所需试剂的配置 | 第52-54页 |
| 3.2.2 实验步骤 | 第54-57页 |
| 3.2.3 Western Blot的实验结果 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
