| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 禽流感概述 | 第11页 |
| 1.2 禽流感分类及命名 | 第11-12页 |
| 1.2.1 禽流感分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 禽流感命名 | 第12页 |
| 1.3 H9亚型低致病性禽流感的危害 | 第12-13页 |
| 1.4 H9N2亚型禽流感病毒的变异特性 | 第13页 |
| 1.5 H9亚型低致病性禽流感的流行病学 | 第13-14页 |
| 1.5.1 国外流行情况 | 第13页 |
| 1.5.2 国内流行情况 | 第13-14页 |
| 1.6 禽流感病毒的病原学特征 | 第14-15页 |
| 1.7 禽流感病毒的检测方法的研究 | 第15-19页 |
| 1.7.1 禽流感病毒的分离与鉴定 | 第15-16页 |
| 1.7.2 血清学检测 | 第16-18页 |
| 1.7.2.1 HA和HI实验 | 第16页 |
| 1.7.2.2 琼脂凝胶免疫扩散实验 | 第16页 |
| 1.7.2.3 神经氨酸酶抑制试验 | 第16页 |
| 1.7.2.4 酶联免疫吸附实验 | 第16-17页 |
| 1.7.2.5 血清中和实验 | 第17页 |
| 1.7.2.6 免疫荧光技术 | 第17页 |
| 1.7.2.7 胶体金免疫层析法 | 第17-18页 |
| 1.7.3 分子生物学技术 | 第18-19页 |
| 1.7.3.1 RT-PCR | 第18页 |
| 1.7.3.2 多重RT-PCR | 第18页 |
| 1.7.3.3 Real time PCR | 第18页 |
| 1.7.3.4 基因芯片技术 | 第18-19页 |
| 1.8 单克隆抗体技术的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.8.1 单克隆抗体的研制现状 | 第19页 |
| 1.8.2 单克隆抗体技术在动物疫病诊治中的应用 | 第19-20页 |
| 1.8.3 单克隆抗体在禽流感疾病诊治中的应用 | 第20页 |
| 1.8.4 单克隆抗体目前面临的问题及前景 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| 3 材料和方法 | 第22-31页 |
| 3.1 材料 | 第22-23页 |
| 3.1.1 毒株、实验动物、鸡胚与细胞 | 第22页 |
| 3.1.2 主要试剂耗材 | 第22页 |
| 3.1.3 主要设备 | 第22-23页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第23页 |
| 3.2 方法 | 第23-28页 |
| 3.2.1 抗原的制备 | 第23-24页 |
| 3.2.1.1 X-19 病毒的复苏 | 第23-24页 |
| 3.2.1.2 X-19 病毒的HA效价测定 | 第24页 |
| 3.2.1.3 X-19 病毒的鸡胚尿囊液的浓缩粗纯化 | 第24页 |
| 3.2.1.4 蔗糖梯度离心法纯化X-19 病毒 | 第24页 |
| 3.2.2 动物免疫 | 第24-25页 |
| 3.2.3 间接ELISA方法的初步建立 | 第25-26页 |
| 3.2.3.1 最佳抗原包被浓度和血清稀释倍数的确定 | 第25页 |
| 3.2.3.2 阴阳性临界值的确定 | 第25页 |
| 3.2.3.3 ELISA测小鼠的抗体水平 | 第25-26页 |
| 3.2.4 阳性杂交瘤细胞株的建立 | 第26-28页 |
| 3.2.4.1 NS0细胞的复苏与培养 | 第26页 |
| 3.2.4.2 饲养细胞的制备 | 第26页 |
| 3.2.4.3 融合前瘤细胞的获取 | 第26页 |
| 3.2.4.4 融合前脾细胞的获取 | 第26-27页 |
| 3.2.4.5 细胞融合 | 第27页 |
| 3.2.4.6 杂交瘤细胞的培养及筛选 | 第27-28页 |
| 3.2.4.7 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第28页 |
| 3.2.4.8 杂交瘤细胞的冻存 | 第28页 |
| 3.2.4.9 腹水的制备 | 第28页 |
| 3.3 单克隆抗体的鉴定 | 第28-31页 |
| 3.3.1 腹水和杂交瘤细胞上清单克隆抗体的HI效价测定 | 第28-29页 |
| 3.3.2 腹水和杂交瘤细胞上清单克隆抗体的ELISA效价测定 | 第29页 |
| 3.3.3 单克隆抗体的同亚型病毒的反应谱 | 第29页 |
| 3.3.4 单克隆抗体的特异性实验 | 第29页 |
| 3.3.5 间接免疫荧光(IFA)实验 | 第29-31页 |
| 3.3.5.1 MDCK细胞培养 | 第29-30页 |
| 3.3.5.2 间接免疫荧光实验 | 第30-31页 |
| 4 结果和分析 | 第31-41页 |
| 4.1 X-19株禽流感病毒抗原的制备 | 第31-32页 |
| 4.1.1 X-19 株H9亚型禽流感病毒的复苏 | 第31页 |
| 4.1.2 X-19 株H9亚型禽流感病毒的浓缩效果 | 第31页 |
| 4.1.3 X-19 株H9亚型禽流感病毒的纯化 | 第31-32页 |
| 4.2 间接ELISA方法的初步建立 | 第32-34页 |
| 4.2.1 包被抗原和阴阳性血清最佳稀释倍数的确定 | 第32-33页 |
| 4.2.2 阴阳临界值的确定 | 第33-34页 |
| 4.2.3 免疫小鼠血清抗体效价的测定 | 第34页 |
| 4.3 杂交瘤细胞的筛选 | 第34-36页 |
| 4.3.1 细胞融合后的筛选 | 第34-35页 |
| 4.3.2 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第35-36页 |
| 4.3.2.1 杂交瘤细胞的第一次亚克隆 | 第35页 |
| 4.3.2.2 杂交瘤细胞的第二次亚克隆 | 第35-36页 |
| 4.3.2.3 杂交瘤细胞的第三次亚克隆 | 第36页 |
| 4.4 单克隆抗体的鉴定 | 第36-41页 |
| 4.4.1 腹水和杂交瘤细胞上清的HI效价测定 | 第36-37页 |
| 4.4.2 腹水和杂交瘤细胞上清的ELISAI效价测定 | 第37页 |
| 4.4.3 单克隆抗体的交叉反应实验 | 第37-38页 |
| 4.4.4 单克隆抗体特异性实验结果 | 第38页 |
| 4.4.5 间接免疫荧光实验 | 第38-41页 |
| 5 结论与讨论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| ABSTRACT | 第48-49页 |
