| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 传统基因打靶技术 | 第9-10页 |
| 1.2 新型基因编辑技术 | 第10-17页 |
| 1.2.1 ZFN技术 | 第11-12页 |
| 1.2.2 TALEN技术 | 第12-13页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9系统 | 第13-16页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9的改进 | 第16-17页 |
| 1.3 敲除第七凝血因子基因的意义 | 第17-19页 |
| 第二章 tru-RGNs对小鼠细胞和动物基因编辑 | 第19-39页 |
| 1. 概述 | 第19页 |
| 2. 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.2 实验动物 | 第19-20页 |
| 2.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 3. 实验方法 | 第21-30页 |
| 3.1 靶向的gRNA设计 | 第21-23页 |
| 3.2 RGNs表达载体构建 | 第23-24页 |
| 3.3 细胞转染 | 第24页 |
| 3.4 中靶和脱靶检测 | 第24页 |
| 3.5 显微注射用gRNA和Cas9体外转录 | 第24-26页 |
| 3.6 体外转录RNA的纯化 | 第26-27页 |
| 3.7 微注射法制备基因敲除小鼠 | 第27-28页 |
| 3.8 小鼠F0突变检测 | 第28-30页 |
| 4. 实验结果 | 第30-39页 |
| 4.1 tru-RGNs和std-RGNs对小鼠细胞的基因敲除 | 第30-32页 |
| 4.2 tru-RGNs和std-RGNs对小鼠个体基因敲除 | 第32-39页 |
| 第三章 基因敲除小鼠表型分析及遗传 | 第39-45页 |
| 1. 概述 | 第39页 |
| 2. 材料与试剂 | 第39页 |
| 3. 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.1 基因敲除小鼠血浆PT实验 | 第39-40页 |
| 3.2 血浆的Western Blot检测 | 第40-42页 |
| 3.2.1 血浆BCA法蛋白定量 | 第40页 |
| 3.2.2 Western Blot实验及样品制备 | 第40-42页 |
| 3.3 基因敲除小鼠的繁育与遗传分析 | 第42页 |
| 4. 实验结果 | 第42-45页 |
| 4.1 基因敲除小鼠血浆PT水平的变化 | 第42-43页 |
| 4.2 FⅦ蛋白的表达 | 第43页 |
| 4.3 FⅦ基因敲除F1代小鼠的遗传 | 第43-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 结论与展望 | 第47-48页 |
| 附录A | 第48-49页 |
| 附录B | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 在读期间发表的学术论文和研究成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
