| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 饲用抗生素使用现状 | 第12页 |
| 1.2 溶菌酶 | 第12-19页 |
| 1.2.1 溶菌酶的分类及其编码基因 | 第13-14页 |
| 1.2.2 溶菌酶空间结构与性质 | 第14-15页 |
| 1.2.3 溶菌酶的杀菌机制 | 第15-18页 |
| 1.2.4 猪溶菌酶 | 第18-19页 |
| 1.3 溶菌酶微生物表达体系的进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达体系 | 第19-20页 |
| 1.3.2 酿酒酵母表达体系 | 第20页 |
| 1.3.3 毕赤酵母表达体系 | 第20-21页 |
| 1.3.4 霉菌表达体系 | 第21页 |
| 1.4 溶菌酶的增效技术进展 | 第21-26页 |
| 1.4.1 热变性 | 第21-22页 |
| 1.4.2 化学修饰 | 第22-23页 |
| 1.4.3 分离抗菌肽 | 第23-24页 |
| 1.4.4 基因修饰 | 第24-26页 |
| 1.5 研究背景与意义 | 第26页 |
| 1.5.1 研究背景 | 第26页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第26页 |
| 1.6 研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 猪溶菌酶编码基因的克隆与表达 | 第28-54页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要试剂、溶液以及培养基 | 第29-31页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.4 分子生物学实验 | 第32-34页 |
| 2.2.5 SSL编码基因的密码子优化及表达 | 第34-37页 |
| 2.2.6 SSL的分离纯化 | 第37页 |
| 2.2.7 SSL的酶学性质及其抗菌谱分析 | 第37-38页 |
| 2.2.8 数据处理 | 第38页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第38-53页 |
| 2.3.1 SSL基因在大肠杆菌体系中表达 | 第38-44页 |
| 2.3.2 SSL基因在毕赤酵母中的表达 | 第44-49页 |
| 2.3.3 毕赤酵母发酵液中SSL分离纯化 | 第49-50页 |
| 2.3.4 SSL的酶学性质及抗菌谱 | 第50-52页 |
| 2.3.5 表达体系的选择 | 第52-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第三章 猪溶菌酶中抗革兰氏阴性菌肽的分离与鉴定 | 第54-67页 |
| 3.1 前言 | 第54页 |
| 3.2 材料与方法 | 第54-57页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第54页 |
| 3.2.2 试剂、溶液与培养基 | 第54-55页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第55页 |
| 3.2.4 SSL的蛋白酶酶解 | 第55页 |
| 3.2.5 凝胶过滤色谱分离 | 第55-56页 |
| 3.2.6 反相制备色谱分离 | 第56页 |
| 3.2.7 抗菌肽的LC-MS鉴定 | 第56页 |
| 3.2.8 抗菌肽的合成与抗菌活性分析 | 第56页 |
| 3.2.9 抗菌肽的性质与结构 | 第56-57页 |
| 3.2.10 抗菌肽对靶细胞的形态学影响 | 第57页 |
| 3.2.11 数据处理 | 第57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-66页 |
| 3.3.1 不同蛋白酶对SSL的水解 | 第57-58页 |
| 3.3.2 凝胶过滤色谱的分离 | 第58-60页 |
| 3.3.3 反相制备色谱的分离 | 第60-61页 |
| 3.3.4 抗菌肽的LC-MS鉴定 | 第61-62页 |
| 3.3.5 抗菌肽的抗菌谱 | 第62-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 基因修饰提高猪溶菌酶的抗菌活性 | 第67-83页 |
| 4.1 前言 | 第67页 |
| 4.2 材料与方法 | 第67-69页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第67页 |
| 4.2.2 试剂、溶液与培养基 | 第67页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第67-68页 |
| 4.2.4 分子生物学操作 | 第68页 |
| 4.2.5 SSL与抗菌肽的SP融合 | 第68页 |
| 4.2.6 SSL与含SP的结构域HLH的融合 | 第68页 |
| 4.2.7 疏水肽段WWWWW（5W）与SSL的C端融合 | 第68页 |
| 4.2.8 多聚SP与SSL的融合 | 第68-69页 |
| 4.2.9 融合SSL的结构 | 第69页 |
| 4.2.10 融合产物 6SP-SSL的发酵条件优化与放大 | 第69页 |
| 4.2.11 融合产物 6SP-SSL的酶学性质 | 第69页 |
| 4.2.12 数据处理 | 第69页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第69-81页 |
| 4.3.1 不同SSL融合基因的构建 | 第69-70页 |
| 4.3.2 SSL与SP融合对其抗菌效果的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.3 SSL与HLH融合对其抗菌谱的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.4 疏水肽段 5W与SSL的C端融合对其抗菌谱的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.5 多聚SP与SSL融合对其抗菌活性的影响 | 第73-75页 |
| 4.3.6 融合SSL的结构预测 | 第75-76页 |
| 4.3.7 6SP-SSL诱导条件的优化 | 第76-80页 |
| 4.3.8 6SP-SSL酶学性质的变化 | 第80-81页 |
| 4.4 本章小结 | 第81-83页 |
| 第五章 融合猪溶菌酶的抗菌机理 | 第83-94页 |
| 5.1 前言 | 第83页 |
| 5.2 材料与方法 | 第83-86页 |
| 5.2.1 菌种与质粒 | 第83页 |
| 5.2.2 试剂、溶液与培养基 | 第83-84页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第84页 |
| 5.2.4 6SP-SSL对靶细胞的形态学影响 | 第84页 |
| 5.2.5 6SP-SSL对靶细胞膜渗透性的影响 | 第84页 |
| 5.2.6 6SP-SSL对靶细胞凋亡的影响 | 第84页 |
| 5.2.7 6SP-SSL对靶细胞mazE基因转录水平的影响 | 第84-85页 |
| 5.2.8 数据处理 | 第85-86页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第86-92页 |
| 5.3.1 6SP-SSL对靶细胞的形态学影响 | 第86-87页 |
| 5.3.2 6SP-SSL对靶细胞膜渗透性的影响 | 第87-88页 |
| 5.3.3 6SP-SSL对靶细胞凋亡的影响 | 第88-90页 |
| 5.3.4 6SP-SSL对靶细胞mazE基因转录水平的影响 | 第90-92页 |
| 5.4 本章小结 | 第92-94页 |
| 主要结论与展望 | 第94-96页 |
| 主要结论 | 第94-95页 |
| 展望 | 第95-96页 |
| 论文创新点 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-106页 |
| 附录 1：本文用到的基因及其对应的氨基酸序列 | 第106-111页 |
| 附录 2: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第111页 |
