| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第11-30页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第11-16页 |
| 1.2.1 CRISPR基因编辑技术简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 CIRSPR的类型分析 | 第12-13页 |
| 1.2.3 CAS9的结构和功能 | 第13-14页 |
| 1.2.4 实际应用研究 | 第14-16页 |
| 1.3 胚胎发育 | 第16-22页 |
| 1.3.1 影响胚胎发育的因素 | 第16页 |
| 1.3.2 早期胚胎的发育 | 第16-17页 |
| 1.3.3 表观遗传学对胚胎发育的影响 | 第17-22页 |
| 1.4 RNA甲基化 | 第22-28页 |
| 1.4.1 RNA甲基化简介 | 第22-23页 |
| 1.4.2 m6A的广泛修饰作用 | 第23-24页 |
| 1.4.3 m6a写入——腺苷甲基转移酶 | 第24-25页 |
| 1.4.4 m6a擦除——去甲基酶 | 第25-26页 |
| 1.4.5 m6a读取——结合蛋白 | 第26-28页 |
| 1.4.6 m6A和miRNA | 第28页 |
| 1.4.7 m6a功能对mRNA的命运和生物学的影响 | 第28页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第28-30页 |
| 第二章 试验研究 | 第30-67页 |
| 第一节 KIAA1429敲除对胚胎干细胞影响的研究 | 第30-47页 |
| 1 材料与方法 | 第30-47页 |
| 1.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第30页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 1.1.3 实验材料和耗材 | 第31-32页 |
| 1.1.4 本文引物列表 | 第32-33页 |
| 1.1.5 培基配方 | 第33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-41页 |
| 1.2.1 设计sgRNA | 第33-34页 |
| 1.2.2 sgRNA接头设置 | 第34页 |
| 1.2.3 构建质粒 | 第34-37页 |
| 1.2.4 细胞培养 | 第37-38页 |
| 1.2.5 细胞转染 | 第38页 |
| 1.2.6 细胞流式分选 | 第38-39页 |
| 1.2.7 细胞单克隆培养 | 第39-40页 |
| 1.2.8 细胞基因检测 | 第40-41页 |
| 1.3 结果与分析 | 第41-47页 |
| 1.3.1 质粒构建完成 | 第41-42页 |
| 1.3.2 阳性细胞的筛选结果 | 第42-43页 |
| 1.3.3 基因筛选KIAA1429敲除细胞 | 第43-45页 |
| 1.3.4 敲除后单克隆细胞形态观察 | 第45页 |
| 1.3.5 讨论 | 第45-46页 |
| 1.3.5 小结 | 第46-47页 |
| 第二节 KIAA1429的敲除对胚胎发育影响的研究 | 第47-67页 |
| 2 材料与方法 | 第47-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第47-52页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第47页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第47-48页 |
| 2.1.3 实验仪器和耗材 | 第48-49页 |
| 2.1.4 实验溶液配制 | 第49-51页 |
| 2.1.5 引物列表 | 第51-52页 |
| 2.2 实验方法 | 第52-59页 |
| 2.2.1 sgRNAs (single-guide RNAs)的设计 | 第52页 |
| 2.2.2 PCR模板准备 | 第52-54页 |
| 2.2.3 sgRNA的体外转录和纯化 | 第54-55页 |
| 2.2.4 CAS9体外转录与纯化 | 第55-56页 |
| 2.2.5 受精卵的显微注射与胚胎移植 | 第56-57页 |
| 2.2.6 生产基因突变小鼠 | 第57页 |
| 2.2.7 胚胎检测 | 第57-59页 |
| 2.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 2.3.1 CRISPR/CAS9技术敲除胚胎KIAA1429基因 | 第59-62页 |
| 2.3.2 KIAA1429对于囊胚的影响 | 第62-64页 |
| 2.3.3 KIAA1429对于移植后胚胎的影响 | 第64-65页 |
| 2.3.4 讨论 | 第65-66页 |
| 2.3.5 小结 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-81页 |
| 毕业期间发表论文 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
