| 符号说明 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 1 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 卵母细胞老化的特征 | 第11-14页 |
| 1.1.1 卵母细胞老化对皮质颗粒(CGs)的影响 | 第12页 |
| 1.1.2 卵母细胞老化对纺锤体的影响 | 第12-13页 |
| 1.1.3 卵母细胞老化对微管的影响 | 第13页 |
| 1.1.4 卵母细胞老化对染色体的影响 | 第13-14页 |
| 1.2 卵母细胞老化的机理 | 第14-18页 |
| 1.2.1 卵丘细胞加速卵母细胞老化 | 第14-15页 |
| 1.2.2 MPF和MAPK调控卵母细胞老化 | 第15页 |
| 1.2.3 线粒体功能异常影响卵母细胞老化 | 第15-16页 |
| 1.2.4 异常Ca~(2+)升高导致细胞凋亡 | 第16页 |
| 1.2.5 氧化应激导致卵母细胞老化 | 第16-18页 |
| 1.3 自噬 | 第18-23页 |
| 1.3.1 自噬的发生 | 第18页 |
| 1.3.2 自噬发生的分子机制 | 第18-20页 |
| 1.3.3 自噬的分子调控 | 第20-23页 |
| 1.4 自噬与细胞及年龄老化 | 第23-25页 |
| 1.5 自噬与胚胎发育 | 第25-26页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 2. 材料与方法 | 第27-34页 |
| 2.1 主要试剂及配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验动物及超排处理 | 第28页 |
| 2.3 体内成熟卵母细胞的获取 | 第28页 |
| 2.4 裸卵制备 | 第28-29页 |
| 2.5 DOs的体外老化 | 第29页 |
| 2.6 卵母细胞乙醇联合6-DMAP孤雌激活 | 第29页 |
| 2.7 卵母细胞乙醇孤雌激活 | 第29页 |
| 2.8 SrCl_2激活处理 | 第29页 |
| 2.9 卵母细胞激活的判定 | 第29页 |
| 2.10 LC3Ⅱ免疫荧光染色及定量分析 | 第29-30页 |
| 2.11 LC3ⅡWestern Blot定量分析 | 第30-32页 |
| 2.11.1 Western blot相关试剂的制备 | 第30页 |
| 2.11.2 细胞LC3蛋白样品的制备 | 第30页 |
| 2.11.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-32页 |
| 2.11.4 抗原抗体的结合及显色 | 第32页 |
| 2.12 卵丘细胞培养与H_2O_2条件培养基(H_2O_2CM)制备 | 第32-33页 |
| 2.13 数据统计 | 第33-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-44页 |
| 3.1 小鼠卵母细胞体内老化期间自噬的变化规律 | 第34-35页 |
| 3.2 不同体外老化培养体系与自噬的关系 | 第35-36页 |
| 3.3 添加RAPA/3-MA对卵母细胞激活率的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 添加RAPA/3-MA对卵母细胞孤雌发育的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 添加RAPA/3-MA对卵母细胞碎裂的影响 | 第38-39页 |
| 3.6 添加RAPA/3-MA对LC3II表达量的影响 | 第39-42页 |
| 3.7 3-MA不同时间段抑制培养对卵母细胞碎裂的影响 | 第42-44页 |
| 4.讨论 | 第44-46页 |
| 5. 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第74页 |
